western-blot實驗常見問題及解決方案

常見問題 解決對策

兩塊玻璃板之間灌膠，膠總是不平 玻璃沒有洗乾淨，應該洗得很乾凈

過硫酸銨和TEMED加量相對較多

加完試劑後應搖勻

總是漏膠 避免玻璃邊緣（與膠條接觸處）破損

將兩塊玻璃板擺放對齊，底部處於同一平面

膜上有明顯氣泡 操作時將氣泡完全排除

靠膜一側的濾紙應鋪平

特異性低 優化一抗

提高一抗和二抗的稀釋度

降低SDS-PAGE中蛋白的上樣量

背景高 優化封閉液

優化洗滌緩衝液，增加洗滌次數

減少曝光時間

信號低 優化一抗

濃縮樣品

選擇更高靈敏度的發光液，如enlight等。

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