質粒DNA細胞轉染注意事項

1， 質粒的構建：啟動子的選擇

啟動子的選擇對於轉染基因的有效表達是非常重要的。對於轉染過程本身雖然無甚影響，但是對轉染結果卻有著微妙的影響。

2， 質粒的大小和質量

線性化還是超螺旋會影響轉染結果：超螺旋質粒的轉染效率比線性DNA高得多，特別是瞬時轉染。而線性化DNA轉染的整合幾率高。質粒太大了轉染會困難一些。畢竟，相對緻密、較小的外源異物被細胞內吞的幾率要大一些。如果你的質粒正好比較大，又沒有經驗，選擇特別註明可以轉大質粒的轉染試劑成功幾率會高一些。有的轉染試劑還會提供一些促進DNA凝聚的成分，使得DNA形成轉染複合物時更緻密一些，更容易轉染一些。純化質粒的質量也會影響轉染效率，一定要選擇高質量的質粒。

3， 質粒DNA的濃度和量

既然質粒純化已經不成問題，初學者通常都不會在乎甚至願意多加點DNA，但是要注意的是，DNA量過少固然轉染效率不高，DNA量過多同樣會降低轉染效率。所以預實驗需要按照說明書的要求，按一定比例混合適量的質粒DNA和轉染試劑。有的轉染試劑要求DNA的量多些，有的轉染試劑效率高只要很少DNA。

4， 轉染試劑的選擇

在確定了質粒的質量之後，就要考慮轉染試劑的選擇了。目前大多數用的是脂質體類的轉染試劑，但這類試劑的毒性較大，轉染效率低，最好選擇非脂質體的轉染試劑，如Entranster試劑。