裸鼠成瘤操作方法
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腫瘤細胞和癌細胞
腫瘤細胞有良性和惡性之分;癌細胞則是惡性,是會擴散的細胞。腫瘤細胞包含癌細胞,它們共同特點是從基因水平上失控的、能無限增殖的細胞。癌細胞有三個顯著的基本特徵即:不死性、遷移性和失去接觸抑制。
實驗室常用成瘤細胞
常規較容易成瘤的細胞:Hep-G2(肝癌),Hep2(喉癌),NCI-H460(大細胞肺癌), A431(表皮癌),SK-OV-3(卵巢癌),MCF-7(乳腺癌)SKBR3, A375/B16-F10(人黑色素瘤細胞),SGC7901 人胃腫瘤細胞 ,KB人口腔表皮樣癌細胞可以成瘤但是比較慢的細胞: CNE(鼻咽癌),A549(肺癌), SPC-A-1(肺腺癌), HT-29(結腸癌),BEL-7402(肝癌),MDA-MB-231 乳腺癌 , CT26 (小鼠結腸癌細胞 ),SH-SY5Y (人神經母細胞瘤細胞 ) , U251 (人膠質瘤細胞) , BGC-823(人胃癌細胞) ,PC-3 (人前列腺癌細胞)
一些比較有爭議的細胞: Hela(宮頸癌),HCT(人回盲腸癌細胞/人結直腸癌腺癌細胞)。其他:BMSC(骨髓間充質幹細胞)認識裸鼠 無胸腺裸鼠(Nude Mouse,簡稱裸鼠)。目前已成為醫學生物學研究領域中不可缺少的實驗動物模型。特別是在腫瘤學、免疫學、藥品與生物製品的安全性評價及有效藥品的篩選等實驗方面,它有著特殊的價值。 裸鼠(純合子nu/nu突變鼠)主要表現為無毛(但可看到一種細毛組織學證明有被毛濾泡)以及缺乏正常胸腺。雜合子小鼠(nn/+)各方面表現都正常。
小鼠中有若干突變基因,它可產生一種為無毛的表現(phenotype),例如無胸腺裸鼠(Nude)、裸鼠(Naked)、無毛鼠(Hairless)、無鼻毛鼠(Rhinol),不要把這些突變鼠基因相互混淆。裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表現型,因此,不能將「裸鼠」與「無毛鼠」兩詞交換使用。
裸小鼠:抵抗力差,易在SPF環境下可生存,所用的籠具、墊料、飼料、 飲水患病毒性肝炎和肺炎,因而飼養和繁殖要求條件比較嚴格,等都要求經過嚴密滅菌消毒並採用隔離器飼養,以保證長期存活並進行繁殖。 裸大鼠: 一般特徵似裸小鼠,但軀幹部仍有稀少被毛並非象裸小鼠那樣完全無毛,頭部及四肢毛更多。裸大鼠易患呼吸道疾病。
裸小鼠
裸大鼠
裸鼠的選擇
雖然說以裸大鼠代替裸小鼠,具有移植腫瘤大,取血量多,可行某些外科小手術等優點。因此比裸小鼠有一定優越性,其缺點是維持經費比裸SPF小鼠更高,另外裸大鼠目前不怎麼流行。所以我們實驗室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。
隨著裸小鼠年齡增長或有關因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內正常T細胞會增加,故接種腫瘤實驗一般採用4--6周齡的裸鼠。
裸鼠成瘤
接種部位消毒
接種
排空入針口
接種後觀察(細胞團)
接種後觀察(腫瘤)
腫瘤測量
尾靜脈注射給葯
裸鼠活體熒光
注意事項
(1)首先你要確定你的細胞能否成瘤,或者說成瘤效果好不好!這個一定要多查查文獻
(2)細胞接種量1*107/200ul/只,或者濃縮為1*107/100ul/只,根據腫瘤細胞成瘤效果調整細胞量,最高不要超過1*107。接種腫瘤實驗一般採用4--6周齡的裸鼠,裸鼠太老會加大成瘤難度,放大個體差異。
(3)接種的部位,根據個人經驗,背部、腋下、頸部均可以,當然腋下和頸部效果最好。
(4)接種時由裸鼠體側腰部稍靠上的部位進針,要保證與接種點的距離小於針頭的長度,向頭部方穿行,絕對不能刺破皮膚或者刺破肌肉層,接種最好在1小時之內完成,可以預先將細胞放在冰盒裡暫為保存
(5)鼠皮下種瘤後,可以通過應用免疫抑製劑,比如環磷醯胺(2mg每隻,打兩天)來加速瘤體的生長(我們實驗室沒試過)。
(6)一般一周到兩周即可觀察到是否成瘤成功。成瘤成功後,我們實驗室常規採用隔天測量腫瘤,最後再彙集數據繪製腫瘤生長曲線(如客戶有要求另論)。
(7)最後,不要擔心裸鼠承受不了,大膽的的接種,要勤觀察記錄腫瘤生長情況以及裸鼠情況,成瘤很快,後續的記錄和測量很慢。
本文來自威斯騰生物
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