最全分光光度計概況組件原理及應用介紹

分光光度計是一種在科學研究中經常會用到的儀器。它用來定量測量分光光度計中穿過樣品的光線有多少被化學物質吸收。

分光光度計是一種在生物，化學，臨床和環境研究中普遍使用的儀器。

分光光度法是通過在分光光度計中使光束通過樣品來測量化學品可以吸收多少光。

通過測量檢測到的光強度，該方法可用於確定樣品中溶質的濃度。

分光光度法的概念

發送到樣品的光束由光子束構成。

當光子遇到樣品中的分子時，分子可以吸收其中的一些分子，減少光束中的光子數量並降低檢測信號的強度。

透射率是穿過樣品的光的一部分。它被定義為在入射光強度下穿過樣品的光強度。

吸光度與透射率相反，對應於分光光度計測量的量。

根據吸光度，溶液樣品中的濃度可以從比爾 - 朗伯定律確定，其表明吸光度和樣品濃度之間存在線性關係。根據Beer-Lambert定律，吸光度是吸收係數的乘積，吸收係數是給定波長下溶質吸收的光量的量度，是光通過的距離。樣品，或行進距離，以及溶質的濃度。通常，測量吸光度的目標是測量樣品的濃度。

分光光度計的組件

每個分光光度計包含一個光源，一個準直器（透鏡或一個傳輸強烈和直線光束的聚焦裝置），一個單色器，用於分離不同波長的光束，以及一個長度選擇器 用於選擇所需波長的波或槽。 在該視頻中呈現的分光光度計中使用的光的波長在紫外和可見光的範圍內。 分光光度計還包含樣品架，光電探測器和顯示探測器結果的屏幕。

最近的分光光度計直接耦合到計算機，其中可以控制實驗參數並顯示結果。

分光光度計的工作原理

進行分光光度測定時，請務必採取適當的預防措施，例如戴手套，具體取決於您使用的生物或化學溶液的類型。

在測量樣品的紫外-可見光譜之前，打開設備並讓燈和電子元件加熱。

準備相同溶液的空白樣品，具有相同的pH和相似的離子強度，但沒有分析的組分;由於比色皿和溶劑可以分散光，因此分析該樣品是必要的步驟。

傳統的分光光度計樣品架設計用於容納塑料和石英碗。將原始溶液吸移到碗中。

擦去任何指紋並濺到碗的外側後，將比色杯正確插入樣品架並關閉杯蓋門。

永遠不要忘記關上門，因為從開放式分光光度計發出的紫外線輻射會損壞眼睛和皮膚。

編程將傳輸到樣品的所需波長或波長範圍。這取決於分析的組分可以吸收的最佳波長。然後，通過測量空白樣品使機器歸零，這將減去由於樣品緩衝液引起的底部吸光度。

根據您正在進行的分光光度實驗的類型，可能需要在樣品測量之前生成標準曲線，從中可以最終確定樣品中分析的化合物濃度。

讓樣品達到適當的溫度並輕輕混合，以免引入氣泡。然後可以將樣品直接添加到機器內部的碗中，並且可以進行讀數。

對樣品進行吸光度測量後，對實驗進行適當的計算;例如，確定濃度或酶活性水平。

分光光度計的應用

分光光度計的通常用途之一是測量細胞密度。細胞密度測量可用於產生細菌的對數生長曲線，從中可以確定重組蛋白整合的最佳時間。

分光光度計還可用於測量化學反應速率。在該實施例中，吸光度用於監測酶促反應，通過452nm的中間反應隨時間消失。可以通過將數據與適當的等式匹配來計算該酶促步驟的速率。

微量分光光度計的引入消除了對樣品架的需求。這些分光光度計使用表面張力來保持樣品。

微量分光光度計是測量昂貴的小體積樣品（如生物分子，包括蛋白質和核酸）的質量和濃度的最佳選擇。

蛋白質在280nm處的吸光度取決於在色氨酸，酪氨酸和苯丙氨酸中發現的芳族側鏈的含量，以及兩個半胱氨酸之間存在的二硫鍵。

蛋白質的濃度可以由其在280nm處的吸光度和其吸收係數確定，該吸收係數基於氨基酸的組成。

DNA和RNA在260nm處具有最大吸光度，從中可以確定它們的濃度。還可以從吸光度讀數與特定波長的比率來評估核酸的純度。