知識點，三葉青里黃酮成分的分離和含量測定

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一、黃酮的分離

從植物向溶劑中轉移的過程,主要影響因素是所選溶劑中黃酮類物質的溶解度目前常用的有機溶劑包括甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、石油醚、丙酮等,其中由於甲醇和丙酮等溶劑的毒性較大,而乙醇相對安全且易回收等特點,因此乙醇是目前總黃酮提取中的常用溶劑。基於乙醇為提取溶劑的三葉青總黃酮提取方法主要包括迴流法和超聲法。其中迴流法是最常用且提取效率最高的方法。迴流法是指用揮發性有機溶劑浸提三葉青藥材成分,浸提液被加熱,溶劑餾出後又冷凝迴流至藥材,這樣周而復始,直至有效成分提取完全。包括迴流熱浸法和迴流冷浸法,其中熱浸法溶劑用量較多,且在循環時不能更新,而冷浸法的溶劑用量較小,提取時可以循環更新,因此更適合用於三葉青的總黃酮提取。超聲法提取黃酮是相對較新的方法,其原理是利用超聲波在液體中的空化作用加速黃酮從植物藥材中浸出,另外還利用其次效應,如機械振動、擴散和擊碎等,加速被提取物的釋放。此法具有設備簡單、操作方便、提取時間短等優點,對三葉青總黃酮的提取率為555%3另外還包括基於大孔吸附樹脂的提取新方法。三葉青黃酮的提取方法中已有陳丹351等人發明的三葉青地上部分總黃酮的提純方法專利及劉東峰等基於超臨界二氧化碳萃取三葉青總黃酮的發明專利,均為三葉青總黃酮的提取技術提供了新的方法學支持。

二、黃酮的測定

目前,測定黃酮類物質的方法很多,主要有分光光度法、色譜法。分光光度法是最常用的三葉青總黃酮含量的測定方法,其中包括直接測定法和顯色法直接測定法是在黃酮結構的特徵吸收峰波長處測定其含量,對單一成分的樣本具有檢測方便、快速且準確等優勢。但對於複雜的中藥成分,由於存在的干擾因素較多,會對測定結果產生影響,出現較大誤差。另一種總黃酮含量測定法是在鹼性條件下的顯色法。主要包含兩種顯色方式,一種是NaNO2-A1(NO3)3-NaOH比色法,即在測定過程中依次加入NaNO2、A(NO3)3、NaOH溶液,產生穩定的紅色化合物在(505±5)m處進行比色測定含量,此法是目前應用最為廣泛的測定黃酮類化合物的方法,可以有效地排除多糖和皂苷的干擾。另一種是氯化鋁顯色法,即在測定的溶液中加入氯化鋁溶液,A1+與黃酮類物質的3-或5-羥基與4-羰基,或3,4-鄰二酚羥基絡合顯色,在413mm處有最大吸收色譜技術已經廣泛地應用於各種天然產物的定性和定量分析中,常用的色譜技術分為氣相色譜和液相色譜兩大類。由於黃酮類物質的沸點高,對熱不穩定等特徵,在進行氣相色譜測定前需要對樣本進行衍生化處理。因此,在三葉青總黃酮的測定應用中,高效液相色譜法使用較為廣泛,也是目前公認的最佳方法。但高效液相色譜存在一定的缺點,主要是價格昂貴,分析時間長,分離效率低等。