細胞生長緩慢如何解決?
08-28
細胞生長緩慢如何解決?
5.用CO2探頭(carborite)檢測孵箱環境。6.用標準混合氣重新標定零值和CO2實際值。三.實驗室是否發生其他變化?
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細胞生長緩慢是實驗人員在培養細胞時常遇見的問題,那麼究竟是哪些因素影響?又如何改善那?
細胞生長緩慢
一.個別人的培養體系出現問題
1.檢查你所培養的細胞是否存在污染。(a)如果培養細胞未添加抗生素(必須添加?),細胞污染則是可能出現的。
(1)用肉眼和顯微鏡進行檢查(2)如果細胞被污染則要棄掉。(b)由於支原體污染不容易覺察到,因此必須定期檢測(c)檢測可能污染的途徑和原因
2.檢查你用於培養細胞的培養基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規使用的是粉劑或10X儲存液,而現在購買的培養基更換為1X液體,而隨後證明問題就出自於此,處理方法請參見下則分享內容。
3.如果問題與培養基無關,那麼很可能還是細胞的問題。(a)復甦另一支凍存的細胞,並且與正在培養的細胞加以比較。兩種細胞的培養應分開,以免在培養之初就產生污染。隨後按(b)~ (d)步的方法做排查。
(b)對傳代培養的細胞進行計數,並繪製生長曲線與以前培養該細胞的資料進行比較,檢在是否有下列改變:(1)傳代時是否接種密度過低。(2)細胞傳代是否過於頻繁。
(3)傳代前細胞平台期是否過長。
(c)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號?檢查批號和供應商。(d)是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞?應檢測:(1)胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時間是否過長。
(2)消化液的濃度和活性是否過高、過強。(3)胰蛋白酶消化時、孵箱溫度是否過高。
(4)吹打消化細胞時是否過於用力。(5)細胞是否對EDTA過於敏感(如果添加了EDTA),(6)胰蛋白酶稀釋是否有誤。(7)是否使用了一批劣質的胰蛋白酶消化液。二.問題較為普遍,其他人也遇到同樣的困難檢查共用的設備和試劑溫室和孵箱溫度
1.溫度和溫度設定不準。(a)自動調溫器損壞。(b)開關孵箱門過於頻繁。(c)孵箱門未關緊。 (d)風扇損壞造成散熱不均。用攜帶型溫度表重新標定孵箱溫度。2.孵箱濕度不能維持(a)水盤中未加水,
(b)孵箱有滲漏。(c)開關孵箱門過於頻繁,(d)在Petri培養皿中放置一定量的PBSA,每日稱重,以檢查蒸發率。3.孵箱的C02濃度不準(a)開關孵箱門過於頻繁。(b)CO2控制器出現問題。4.用預先標定的培養基監測箱體內的PH。1.與細胞培養有關的人員是否改變?
(1)培養細胞人員是否發生增減(2)準備實驗人員是否發生增減(3)實驗人員的準備過程是否規範(4)實驗人員是否接受過系統訓練
(5)實驗空間和布局是否過於擁擠2.細胞培養所需材料是否改變?(1)供應商(2)批號
(3)類型
(4)存儲期限
3.細胞培養的操作過程是否有變化?
(1)孵育時間
(2)操作速度
(3)操作順序
(4)位置
(5)範圍大小
4.細胞培養的專業儀器設備是否完好?
(1)新近購置:是否新添儀器設備?
(2)運行狀況:是否設備損壞?
(3)擺放位置:正在使用的儀器是否有足夠的擺放空間,是否要移動鄰近的儀器?
(4)操作溫度:儀器是否在正常的溫度範圍內運轉,你的樣品是否也需此溫度範圍?
原文:細胞生長緩慢如何解決?
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