細胞培養入門詳解！

08-13

細胞培養入門詳解！

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所需設備和容器

超凈台

生物安全櫃

細胞培養箱

顯微鏡

接下來就是細胞的「家」啦！各種size的細胞瓶、細胞皿，還有細胞培養板了。大家注意（細胞皿底部是要經過處理的喲，不然細胞無法貼壁，這你可要哭了哦 o(╥﹏╥)o）......

相關知識

何為細胞培養？

細胞常規培養是在細胞房中進行，在超凈工作台或生物安全櫃中，把細胞處理好，根據需要加入細胞培養基，放入細胞培養瓶/皿或細胞培養板中，再放到帶有5% CO2 的37℃恆溫培養箱中培養。細胞就像花花草草，尤其是細胞株基本每天都要觀察、打理的哦！

培養的細胞從哪裡來？

1.細胞株

簡單說就是買的或送的。

2.原代細胞

組織或血液中提取的。一般細胞株可以連續傳代，而原代細胞養著養著就掛了。

培養細胞的生長方式有哪些？

1.貼壁生長

必須貼附於支持物表面才能生長。見於各種腫瘤細胞等。（你把培養皿或培養瓶底朝上，細胞也不會掉下來。

2.懸浮生長

於懸浮狀態下即可生長，不需要貼附於支持物表面。見於各種造血系統腫瘤細胞等。

PS：

每代貼附生長細胞的生長過程分為：

1）遊離期：細胞接種後在培養液中呈懸浮狀態，也稱懸浮期。

2）貼壁期：細胞貼附於（膠原、玻璃、塑料、其他細胞等）。

3）潛伏期：細胞有省長活動而無細胞分裂。

4）對數生長期：細胞數隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進行實驗研究。

▲細胞貼壁期示意圖

培養細胞需要怎樣的生長條件？

1.細胞的營養需要

2.細胞的生存環境

溫度：37℃

O2：95%

CO2：5%

PH：7.2-7.4

一定的滲透壓

3. 無污染

4.無毒

細胞完全培養基的組成有哪些？

基礎培養基：80-95%

血清：5-20%

碳酸氫鈉：2.0g/L

青、鏈黴素：各200單位/毫升

細胞傳代

Q1：何為細胞傳代？

細胞在培養器皿中生長一定時間後，被分開接種到新的培養器皿即為細胞傳代。

Q2:為什麼要傳代？

簡單說就是「孩子」長大了，要「分家」！

細胞株在培養過程中數量會不斷增多，但是培養細胞的細胞瓶/皿的空間有限，就會導致細胞之間接觸過於緊密，會使得細胞增殖收到抑制，所以我們必須把其中一部分細胞轉移到別的細胞瓶/皿，讓細胞有足夠的生長空間。

Q3:什麼時候傳代？

觀察培養基是否正常，細胞狀態如何，細胞密度如何，決定是否傳代。如培養基變黃，細胞長成緻密單層等情況。

Q4：傳代方法有哪些？

1.懸浮生長細胞傳代

1)離心法傳代：離心1000轉/分去上清，沉澱物加新培養液後再混勻傳代。

2)直接傳代法：懸浮細胞沉澱在瓶壁上，將上清培養液去除1/2~2/3，然後用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。

2.半懸浮生長細胞傳代

此類細胞部分呈現貼壁生長現象，但是貼壁不牢，可用直接吹打使細胞從瓶壁上脫落下來，進行傳代。

3.貼壁生長細胞傳代

採用胰酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

學姐的經驗之談

靠技術「馴化」細胞

1）嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘乾。

2）不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套。

3）有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。

4）水浴鍋很臟，生化培養箱要是得手動加濕的話，盤裡的水也會很臟，勤換 (滅菌水加進去)。

5）晚上離開的時候最好給細胞房照紫外，超凈台是用完就開紫外（記得照30min後關掉）。

6）最好的是同一時間就你一個人在用細胞房在養細胞。

靠內心"感動"細胞

1）自己的細胞自己養，血的教訓。

2）在生物安全櫃 (或者超凈台)，槍頭，血清管，血清，培養基，瓶子都足夠好，並且細胞房有良好的衛生措施 (比如隔離服，手套，口罩，清潔，HEPA 等等) 且不違反操作原則的情況下，你其實很難污染。

3）上述條件不完備的情況下，就要多注意無菌操作了：比如要用的東西提前拿到檯子里照啊 (不過這個其實也不大好，因為會擋住紫外線)，使用前 SDS+酒精擦檯子，進出超凈台一定要酒精擦手。

4）少對細胞說話，多靠內心來感動它們 (是的! 心不誠是不可以的!)

養細胞就像打仗，知彼知己，百戰不殆！只有了解你養的對象，才能把它養好！

原文鏈接：CellMax胎牛血清