食用菌母種的製作，大多使用PDA或PSA及其改良培養基，但一些偏遠地區或小批量生產時，配方中的原材料由於價格較高（一般是分析純），且在農村不易購到，耽誤生產。現介紹幾個簡易製作方法。 1、明膠型培養基。明膠，指食用明膠，一般食品化工商店有售，價格較低。食品生產中用作凝固劑或固形劑的明膠，用於母種生產上代替瓊脂（洋菜、瓊膠）做凝固劑，筆者90年代初即進行試驗並用於生產，證明效果不錯，但需對所購商品進行凝固性試驗，最後確定每1000毫米中的使用量後，需堅持用該種品牌，不可隨意更換。一般生產配方為：土豆200克，麥麩30克，白糖20克，明膠50克左右，水1000毫升。 2、原糧型培養基。即穀粒培養基。小麥、玉米、豆類等均可作為母種培養基，且生產效果很好。方法是：玉米、大豆需破碴，使其大小與小麥粒相仿，浸泡至無白心，用開水煮熟後迅速使用冷水沖洗，撈出後隨即拌入適量麥麩，然後裝入試管。建議用該培養基時改換大型試管一般可使用20×200或25×200規格的試管，既方便操作，又相應加大一次性生產數量，經濟上、時間上均合算。 3、土豆型培養基：選擇大個頭光滑土豆，去皮後切成撅形條，土豆條長12－15厘米，兩端分別厚13厘米和0．2厘米，寬度根據試管直徑確定，一般為2厘米以下，並盡量使其成半圓形，以使圓邊貼近試管壁。裝入試管，常規滅菌等操作即可。 4、南瓜條培養基：秋季南瓜成熟後，可直接和來作母種培養基參照土豆型培養基切制南瓜條，製作同上。 5、蘋果泥培養基：將成熟的蘋果去皮、去核，研碎成果泥，裝入試管，常規滅菌。只是需要接種時用一滅菌木條將果泥壓為長條型，使之與普通培養基相彷，而後再常規接種。 6、胡蘿蔔條培養基：可參照土豆培養基進行 食用菌木渣母種及其製作方法，它涉及一種食用菌母種和它的製作工藝。本發明的食用菌木渣母種由下列原料按重量百分比製成：木渣75-90％、麩皮10-23％、白糖0.5-1.5％、石膏或石灰0.5-1.5％。攪拌：將以上所述的食用菌木渣母種的原料加水攪拌均勻；接種：將滅菌後的食用菌木渣母種降溫至室溫條件下進行接種，將接種的瓶子放在25-28℃的環境中進行培養，25-30天即可。本發明食用菌木渣母種具有配方簡單、原料易得、成本低廉、無需專用設備、接種成活率百分之百、菌絲生產周期比現有PDA法提前20-30天、母種保質期長(4-6個月)的優點。食用菌木渣母種的製作方法具有好學易懂、易操作、不受規模大小的限制，特別適合城鎮、農村一家一戶進行生產的優點。 配方：馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養基。馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂18～20克，水1000毫升。pH值5.5～6。 該配方適合香菇及多種食用菌分離和培育母種之用。如果作保藏菌種用，在配方中可再添加磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂0.5克，維生素B110毫克。 製法：選擇質量好的馬鈴薯洗凈去皮（已發芽的要挖去芽及周圍一小塊），將其切成薄片，稱取200克。放入鋁鍋中，加入清水1000毫升，加熱煮沸，維持30分鐘，用四層紗布過濾，取其汁液，然後將瓊脂放在水中浸泡後加入馬鈴薯汁液中，繼續加熱至全部溶化（加熱過程中要用玻璃棒不斷攪拌，以防溢出和焦底），最後加入葡萄糖，並且熱水補足1000毫升，測定並調節pH值（用5％的稀鹽酸或5％的氫氧化鈉溶液）到所需範圍內。配製好的培養基要趁熱分裝入試管，裝入量約為試管長度的1／5，裝管時要注意勿使培基沾附試管口。分裝完畢塞上棉塞，棉塞要求鬆緊適度，塞入長度約為棉塞總長度的2／3左右，使之既有利通氣又能防止雜菌侵入。 塞好棉塞後，把試管直放在小鐵絲筐中，蓋上油紙或牛皮紙，用繩紮好，或用繩子把試管紮成幾捆，棉塞部分 滅菌後，待培養基溫度下降至60℃時，再撰成斜面，以防冷凝水積聚過多。擺斜面時，先在桌上放一木棒，將試 管逐支斜放，使斜面長度不超過試管總長度的 1／2，冷卻凝 固後，即成斜面培養基。 滅菌後的斜面培養基，要進行無菌測定，可從中取出2～3支，放入30℃左右的恆溫箱中培養3天，培養後表面如 仍光滑，無雜菌出現，就可供接種。多次製作後，已有把握，可不做無菌測定試驗。 高壓滅菌操作步驟和注意事項： （Ⅰ）在滅菌鍋內加水至水位標記高度，首次使用需先進行一次試驗，水過少易燒乾造成事故，水過多棉塞易受潮。 （Ⅱ）放火鍋內的材料，不宜太擠，否則會影響蒸汽的流通和滅菌效果。體積大的瓶子，要分層放置或延長滅菌的時間。 （Ⅲ）蓋上鍋蓋，同時均勻擰緊鍋蓋上的對角螺旋，勿使漏氣，關閉氣閥。 （Ⅳ）點火、逐漸升溫。水沸後，待鍋內壓力升至0.5 公斤／厘米2時，逐漸開大放氣閥，放凈鍋內冷空氣至壓力降至"0"，再關閉放氣閥。如不放盡冷空氣，即使加大至所需壓力，而溫度達不到應有的程度，也不能達到徹底滅菌的要求。 （V）繼續DO％至所需壓力時，開始記滅菌時間，調節火力大小，始終維持所需壓力至一定時間。 （VI）停火。讓壓力自然回降至"0"時，打開放氣閥。 （Ⅶ）打開鍋蓋，用木塊墊在蓋下，讓蒸汽漸漸溢出，借餘熱烘乾棉塞。 （Ⅷ）取出已滅菌的材料，並清除剩水，以防鍋底鏽蝕。 食用菌母種的製作由於受污染及質量問題的困擾，很少有菇農朋友自行製作，較多的是製作原種：現將兩種簡單易行的母種製作方法介紹給廣大菇農朋友。只要嚴格按照下列步驟操作，即可制出高質量母種。 一、選擇菌種 1．試管種的選擇 香菇試管種應菌絲潔白，粗壯，整齊，菌苔表面平整，無或有少量水珠，菌齡25-30天；金針菇試管種應菌絲白色，平伏，濃密，無或有少量粉孢子，菌齡22～27天。 2．原種的選擇 瓶裝香菇原種應菌絲潔白，密集，尖端整齊，絨毛菌絲旺盛，菌齡30～35天；瓶裝金針菇原種應菌絲密集，尖端整齊，有或無氣生菌絲，無或有少量粉孢子，菌齡25～30天。 二、選擇季節和處理場所 為減少雜菌污染的機會，應避開濕潤多雨的季節，秋後則較為理想。場所應選擇環境潔凈、空氣清新、地勢高燥、遠離畜禽欄舍的房舍較為理想。 三、菌種培養 將上述長滿菌絲的4支試管種、4瓶原種移至子實體發生較適溫度(香菇12～18℃；金針菇8～15℃)和明亮的漫射光下，促進原基、菌蕾和子實體的發生。選取先生成子『實體的2支試管種和2瓶原種備用。 四、準備培養基 製作試管斜面培養基10支。配方：胡蘿蔔100克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000克。 製作方法；按配方正確稱取各種營養物質，將胡蘿蔔、去皮、切片，加水為料的5倍，文火煮沸30分鐘，用4層紗布過濾取汁。加入其他營養物質，補水至1000毫升。加入團硨的瓊脂，文火煮沸，攪拌至溶解。將培養基趁熱裝入試管，裝入量為試管長度的1／5，加棉塞後用牛皮紙包紮，常規滅菌，擺成試管斜面。 五、消毒接種箱 將上述培養基10支、試管種2支或原種2瓶，酒精燈及接種工具放人接種箱，按每立方米空間10毫升甲醛溶液與等量或半量的高錳酸鉀熏蒸消毒1小時，或用「霧消靈」，按每立方米3克，點燃熏蒸消毒半小時。 六、接種、培養 1．在無菌條件下，於酒精燈火焰上操作。 打開試管棉塞，用接種刀挑取子實體內少許組織，移接至試管培養基斜面中央，每支試管種接5支試管斜面。經適溫(18～20％)培養2～3周，即得到純菌絲母種。 2．在無菌條件下，於酒精燈火焰上操作。 打開原種牛皮紙，用接種刀挑取子實體內少許組織，移接至試管培養基斜面中央，每瓶原種接5支試管斜面。經適溫(18～20％)培養2～3周，即得到純菌絲母種。 七、出菇試驗 這是檢驗製作的母種達標與否的方法，在菌株用於生產前必須作出菇試驗。可採用瓶(袋)栽培的方法，在常規栽培菌種時，同時試栽培20～50瓶(袋)新制菌種作為對照，如出菇期、出菇數量、菇形大小、肉質厚薄、菌柄長短及菌蓋顏色等相比較無多大差異，所制母種即可作為生產用種。
菌種是主要的生物資源，也是食用菌生產首要的生產資料。一個優良的菌種被選育出來以後，必須保持其優良性狀不變或儘可能地少變慢變，才不至於降低生產性能，能長期在生產中使用。因此，菌種保藏在食用菌生產上具有重要的意義。 一、菌種保藏原理 菌種保藏的方法很多，但原理大同小異。首先要挑選優良純種。利用微生物的孢子、芽孢及營養體；其次，根據其生理、生化性，人為創造低溫、乾燥或缺氧等條件，抑制微生物的代謝作用，使其生命活動降低到極低的程度或處於休眠狀態，從而延長菌種生命以及使菌種保持原有的性狀，防止變異。不管採用哪種保藏方法，在菌種保存過程中要求不死亡、不污染雜菌和不退化。 二、菌種保藏的方法 1、低溫定期移植保藏法。將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養基上，適溫培養，當菌絲健壯地長滿斜面時取出，放在3-5℃低溫乾燥處或4℃冰箱、冰櫃中保藏，每隔4-6個月時間移植轉管一次，具體應根據菌種特性決定。保藏時要注意環境溫度不能太高，以防黴菌通過棉塞進入管內。因此，若用棉塞，可用乾淨的硫酸紙或牛皮紙包紮棉塞，即可減少污染的機會，也可防止培養基幹燥。除草菇菌種外，其他食用菌菌種都能採用此法保藏。 2、液體石蠟保藏法。取化學純液體石蠟（要求不含水分、不霉變）裝於三角瓶中加棉塞並包紙，在1公斤/平方厘米壓力下滅菌1小時，再放入40℃恆溫箱中數天，以蒸發其中水分，至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上，28-30℃下培養2-3天，證明無雜菌生長方可使用。然後用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中。注入量以高出培養基斜面1-1.5厘米，塞上橡皮塞，用固體石蠟封口，直立於低溫乾燥處保藏。保藏時間在一年以上，在低溫下，保藏時間還可延長。 3、沙土管保藏法。取河沙用水浸泡洗滌數次，過60目篩除去粗粒，再用10%鹽酸浸泡2-4小時，除去其中有機物質，再用水沖洗至流水的pH達到中性，烘乾備用。同時取貧脊土或菜園土用水浸泡，使呈中性，沉澱後棄去上清液，烘乾碾細，用100目篩子過篩，將處理好的沙與土以（2-4）:1混勻，用磁鐵吸出其中的鐵質，然後分裝小試管或安瓿內，每管裝量0.5-2克，塞棉塞，用紙包紮滅菌（1.5公斤/平方厘米，1小時），再乾熱滅菌（160℃，2-3小時）1-2次，進行無菌檢驗，合格後使用。將已形成孢子的斜面菌種，在無菌條件下注入無菌水3-5毫升，刮菌苔，製成菌懸液，再用無菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土為止。將接種後的沙土管放入盛有乾燥劑的真空乾燥器內，接上真空泵抽氣數小時，至沙土乾燥為止。真空乾燥操作需在孢子接入後48小時內完成，以免孢子發芽。製備好的沙土管用石蠟封口，在低溫下可保藏2-10年。 4、濾紙片保藏法。取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）濾紙，剪成4×0.8厘米的小紙條，平鋪在培養皿中用紙包裹進行滅菌（1公斤/平方厘米，30分鐘）。採用鉤懸法收集孢子，讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中，再將保藏試管放入乾燥器中1-2天，除去濾紙水分，使濾紙水分含量達2%左右，然後低溫保藏。 5、自然基質保藏法 ⑴麥粒保藏法：取無癟粒、無雜質的小麥淘洗乾淨，浸泡12-15小時，加水煮沸15分鐘，繼續熱浸15分鐘，使麥粒脹而不破，瀝干水分攤開晾曬，使麥粒的含水量在25%左右。將碳酸鈣、石膏拌入熟麥粒中（麥粒、碳酸鈣、石膏比例為10公斤:133克:33克），拌和均勻後裝入試管中，每管約2-3克，然後清洗試管，塞棉塞，滅菌1.5（1.5公斤/平方厘米，2小時），經無菌檢查合格後備用，試管基質冷卻後接種，適溫培養，待菌絲長滿基質後用石蠟塗封棉塞，放低溫保藏。2年左右轉接一次。 ⑵麩曲保藏法。取新鮮麩皮，過60目篩除去粗粒。將麩皮和自來水按1:1拌勻，裝入小試管，每管約裝1/3高度，加棉塞用紙包紮，高壓滅菌（1.5公斤/平方厘米，30分鐘），經無菌檢查合格後備用，將生長在斜面培養基上的健壯菌種，移種至無菌麩曲管中，移種時注意儘管搗勻小試管中的麩皮，呈疏鬆狀態，在適溫下培養至菌絲長滿麩皮為止，將麩曲小管置乾燥器中，在低溫或適溫下保藏。 6、生理鹽水保藏法。取純氯化鈉0.7-0.9克，放入100%毫升蒸餾水中，攪拌均勻分裝試管，每管5-10毫升，進行滅菌（1公斤/平方厘米，30分鐘），經無菌檢查合格後備用，將待保藏的菌種接入馬鈴薯葡萄糖液體培養基中適溫振蕩培養5-7天。無菌操作吸取少許培養菌種注入經檢驗合格的生理鹽水試管中，塞上無菌橡皮塞，用石蠟塗封，在室溫或低溫保藏。 7、冷凍真空乾燥法。將已培養、生長豐富的菌體或孢子懸浮於滅菌的血清、卵白、脫脂奶製成菌懸液，將懸液以無菌操作分裝於滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5毫升，然後用耐壓橡皮管與冷凍乾燥裝置連接，安瓿瓶放在冷凍槽中於-30℃至-40℃迅速冷凍，並在冷凍狀態下抽空乾燥，並在真空狀態下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本較高。 8、液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種製成菌懸液備用；其次，準備安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%（體積比）甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌（1公斤/平方厘米，5分鐘）。無菌檢查後，接入要保藏的菌種，火焰熔封瓶口，檢查是否漏氣，將封好口的安瓿瓶放在凍結器內，以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫，使保藏品逐步均勻地凍結，直至-35℃，以後凍結速度就不需控制，安瓿凍結後立即放入液氮罐內，在-150至-196℃保藏，該法只有少數科研院所使用。
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