貝克曼庫爾特白血病淋巴瘤多色組合方案

隨著科技的發展，醫學技術有了很大的進步，很多疾病得到了解決，但是醫學研究仍然面臨著很多的挑戰，而白血病淋巴瘤的治療和檢測日益成為了普通群眾關注的熱點。目前，最廣泛使用的血液惡性腫瘤分類方法是由世界衛生組織(WHO)依據國際權威血液學和腫瘤學專家共同建議制定形成的。WHO對於惡性血液病的主要分類包括髓系來源，淋系來源，未定系列的急性白血病，霍奇金淋巴瘤，組織細胞/樹突狀細胞腫瘤，和移植後淋巴細胞增生性疾病。髓系疾病包括5個分組， 每個小組又可包括一些疾病變體，而淋巴系統惡性腫瘤的分類是依照細胞分化成熟度(前體型或成熟型)和主要的細胞系列(B或T/NK細胞)來進行。血液惡性腫瘤的診斷需要結合多種檢測方法分析，其中包括形態學，組織學，細胞化學，免疫表型，細胞遺傳學和分子生物學方法。然而，通過流式細胞儀來了解細胞免疫表型在診斷過程中起著核心作用，因為它提供了一種可分析性的手段。 流式免疫表型診斷血液腫瘤的優勢：

1、可以通過細胞大小、顆粒、抗原強弱區分細胞群； 2、可以去處死細胞； 3、檢測靈敏度高，可以檢測弱表達抗原； 4、多色分析-更精確的確定特定細胞的表面抗原特性； 5、可以檢測同一組織位點共存的兩種腫瘤； 6、體液和細針穿刺得到的活檢組織（非侵襲性的損傷）均可進行檢測。

急性髓系白血病(AML)

臨床和血液學特點：AML主要在成人中發病，隨著年齡增加其發病率也越高，主要是由於白血病細胞大量增殖替代並抑制了正常骨髓造血細胞生成。大多數病人表現為正常紅細胞性貧血，臉色蒼白及相關的心血管癥狀。白細胞總數各異，一般含有一定比例不同分化程度的原始細胞，中性粒細胞減少。常伴有血小板減少，在急性早幼粒細胞性白血病中出現血小板減少常常與瀰漫性血管內凝血(DIC)有關。 分類：通常情況下，對於可疑AML患者，在經過最初的形態學、免疫化學以及細胞免疫表型檢測後，可最初評價是(a)確認為髓系白血病，(b)判斷有無單核細胞，幼紅細胞或巨核母細胞成分，(c)證明是否存在不典型的免疫表型特徵。 髓系相關抗原有很多種，但可以明確為髓系特異性表達抗原標記的只有細胞質髓過氧化物酶(cMPO)。cMPO可以通過細胞化學，免疫組織化學或流式細胞儀進行檢測，儘管在實際工作實踐中細胞化學可能是最廣泛被用於第一線的檢測手段，但是應當指出，細胞化學檢測MPO的敏感性低於免疫學技術，免疫學技術可以同時檢測到具有生物學活性的MPO以及不具有生物活性的MPO前體蛋白。如果超過3％以上(通常作為定義cMPO陽性表達的閾值)的原始細胞MPO的表達陽性，即可初步診斷為AML，接下來可以做第一步免疫表型檢測進行確診和亞型分類。如果細胞化學檢測提示cMPO陰性(最好流式細胞儀也提示陰性表達)，則免疫分型檢測主要用來區分這種cMPO陰性表達的未成熟型白血病與：(i)沒有表型特徵的系列(急性未分化型白血病)，(ii)有髓系表型分化的證據，但沒有淋系表型分化的證據(急性單核細胞白血病，急性紅白血病和急性原始巨核細胞白血病)，或(iii)有淋系表型分化的證據，但沒有髓系表型分化的證據(前體B和T細胞淋巴母細胞性白血病/淋巴瘤)。 貝克曼庫爾特L&L系列分析組合特別適合用於急性白血病篩查檢測，其中髓系組合包含了所有常用的特異性抗原(CD11b，CD14，CD15，CD16，CD117，CD13和CD33)以及各種分化標記(HLA-DR和CD34)。在實際應用時，為了確保可靠的分類以及識別不典型的變異體，當檢測一份新的未成熟型白血病標本時，應同時使用貝克曼庫爾特的L&L髓系組合(3管)、B系組合(2管)、T系組合(2管)。利用貝克曼庫爾特的這3種系列組合進行檢測獲得的不同白血病亞型的典型免疫表型譜概括在表4中。對CD13和CD33組合檢測(髓系組合，3號管)是重要的，因為這些抗原在不同的AML患者中表達並不一致(AML中CD13+CD33+,CD13-CD33+,CD13+CD33-和CD13-CD33-細胞亞群各自的比例分別為65％，23％，8％，4％。此外，在同一個管中組合檢測CD11b，CD14，CD15，CD16與CD45(髓系組合，1號管)有用於幫助同時區分鑒別單核細胞型(CD11b+CD14+CD15+CD16-)和非單核細胞型(CD11b-CD14-CD15-CD16-或CD11b+CD14-CD15+CD16-)中的未成熟髓系細胞和成熟的粒細胞(CD11b+CD14-CD15+CD16+)。全面的第一線的免疫分型方法如貝克曼庫爾特的L&L系列組合同樣也能提供異常表型表達的信息。雖然AML原始細胞表達淋系相關抗原(例如CD2，CD7和CD19)是常見的，可能確實提示存在某種遺傳學亞型，但這種情況不應被立即解釋為"雙表型"或"混合系列，應當進一步做免疫表型二次篩查，以此判定急性混合型白血病的可能性。

成熟的B細胞腫瘤

慢性淋巴細胞白血病/小淋巴細胞淋巴瘤

CD19,CD20和CD21等B細胞相關標誌持續性表達而CD22弱表達甚至不表達。很多情況下，細胞表面可顯示免疫球蛋白(SIg)的克隆表達(κ或λ輕鏈限制)，但是一般來說比較微弱(dim)。但是，儘管SIgdimCD5+CD10-CD23+FMC7-混合表型高度提示為CLL，而且一般可與其他成熟B細胞疾病區別診斷，但是還是需要注意有少部分不典型表型的病例存在。包括較高密度表達SIg(明亮的)，CD23陰性，FMC7和/或CD38陽性的病例。人們對CD38特別感興趣，因為CD38的高表達往往與功能性細胞內Zata鏈相關蛋白激酶(ZAP-70)相關，被認為是預後不良的指標。

B幼淋巴細胞白血病(B-PLL)

免疫表型上，B-PLL細胞膜表面高密度表達SIg和FMC7，同時表達CD19,CD20和CD22等B細胞相關決定簇(表10)。CD38和ZAP-70有不同水平的表達，但與CLL/SLL不同，他們沒有重要的預後提示作用。CD5和CD23隻有在少數病人中表達。儘管有時與套細胞淋巴瘤(MCL)，脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)及有高比例幼淋巴細胞樣的CLL鑒別診斷困難，但是用免疫表型譜及對MCL相關的t(11;14)(q13;q32)易位的遺傳分析可闡明類型。

脾邊緣區淋巴瘤(SMZL)

B細胞相關抗原CD19,CD20和CD22持續表達，CD79a,CD79b和FMC7在大多數病人中表達，限制性的SIg輕鏈一般是中等密度(明亮的)表達。CD5,CD10,CD23,CD25和CD103一般不表達，但是偶有病例出現陽性。CD11c的表達差異很大。與毛細胞白血病鑒別診斷時，CD25和C103陰性可能是最有提示意義的。

毛細胞白血病(HCL)

免疫表型上，HCL細胞顯示明亮的SIg染色，表達CD11c,CD19,CD20,CD22,CD25,CD103和FMC7。CD5,CD10和CD23一般不表達，偶爾有CD5+的病例報道。

淋巴漿細胞淋巴瘤(LPL)

腫瘤性B細胞呈現SIg+，而漿細胞樣細胞更多呈現胞漿內免疫球蛋白和CD138表達。佔主導的表型為CD19+CD20+CD79a+。一般沒有CD5,CD10和CD103。而CD11c,CD22,CD23,CD25和CD38的表達則多變化。

骨髓瘤和漿細胞白血病

免疫表型上，骨髓瘤病人的骨髓漿細胞有重鏈和輕鏈限制的胞漿免疫球蛋白(CIg)，但是沒有SIg。多數是CD19-和CD45-,但是表達CD56(少數病人也可觀察到CD19-CD56-的漿細胞組分)，CD38(明亮的)，CD79a和CD138。偶爾也有惡性漿細胞表達CD10,CD20和HLA-DR。PCL病人的漿細胞與骨髓瘤病人相似，但是CD56更可能缺乏表達。骨髓瘤和PCL的表型譜與正常的多克隆漿細胞不同，正常的多克隆漿細胞表型譜一般為CD19+CD38+CD45+CD56-和CD138+。

套細胞淋巴瘤(MCL)

免疫表型上，惡性淋巴細胞表達輕鏈限制的SIg(明亮的)，CD5,CD19,CD20和FMC7抗原。CD10和CD23一般不表達，極少有病例出現陽性。

瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)

免疫表型上，某些DLBCL病例有典型的生髮中心B細胞表型，這與濾泡性淋巴瘤相似(幾乎所有的轉化FL有該表型，但是，反過來不能確定所有擁有這些特徵的DLBCL是FL轉化而來)，而大多數其他病人的表型是非生髮中心型(CD23缺乏)。細胞表面和胞漿內免疫球蛋白的表達水平不一，多數病人表達B細胞相關抗原CD19,CD20和CD79a，有些病人出現CD5+和/或CD10+。有些間變型的病人可出現CD30+,中心母細胞型為主的病人BCL6常為陽性，而CD138在免疫母細胞型病人中往往呈陽性。高增殖指數是所有亞型的一致特徵，用細胞核Ki-67的表達來表示。

伯基特淋巴瘤(BL)

免疫表型上，所有形式的BL都相似，都表達明亮強度的輕鏈限制的SIg，CD19,CD20和CD22等B細胞相關抗原以及CD10和CD38。核TdT不表達，但是有很大一部分細胞呈Ki-67+。約90%的病人中存在染色體異位，即原癌基因c-MYC從正常的8號染色體位置異位到14號染色體上抗體重鏈基因的增強子附近。因此，分子生物學檢測可用於鑒別BL和瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)。BL和DLBCL的中間形式也可出現MYC基因異位，但是不出現在免疫球蛋白基因附近。

成熟的T細胞腫瘤

T幼淋巴細胞白血病(T-PLL)

T-PLL是一種罕見病，佔全部幼淋巴細胞白血病的20%，佔全部成熟淋巴腫瘤的2%。表型上大細胞和小細胞型T-PLL相似，一般表達CD2,CD3,CD5,CD7和TCRαβ，但是不表達CD1a和HLA-DR。60%病例表現為CD4+CD8-,15%病例表現為CD4-CD8+,25%病例表現為CD4+CD8+，罕見有CD4-CD8-的病例。CD4/CD8共表達在小細胞型中更普遍，可作為診斷T-PLL有用的指征。

T大顆粒淋巴細胞(T-LGL)白血病

WHO把免疫表型CD3+和有克隆性T細胞受體(TCR)重排的(β鏈基因重排比γ鏈更常見)、形態特定的大顆粒淋巴細胞持續性增加的情況分類成T-LGL白血病。所有T-LGL白血病人免疫表型為CD3+，TCRαβ+(常見)或者TCRγδ+(罕見)。TCRαβ+表型的病人80%為CD4-CD8+(或CD4-CD8dim)，偶爾也出現CD4+CD8+或CD4+CD8-抗原表型。相比之下，TCRγδ+表型的病人為CD4-CD8+(60%)或CD4-CD8-。此外，除了有些病例出現CD5-和/或CD7-以外，大多數T-LGL白血病人表達CD2,CD5和CD7。NK細胞相關抗原的表達隨TCR,CD4和CD8表達譜的不同出現變化，但是多數病人為CD16+和CD57+，而CD56較少穩定表達。

慢性NK細胞淋巴增殖性疾病(CLPD-NK)

WHO分類把CLPD-NK描述為CD3-的NK細胞持續性(＞6個月)擴張(一般＞2×109/L)的一種罕見情況。免疫表型上，大多數病人為CD2+CD3-CD5-CD7+(表11)。CD4/CD8的表達模式多數為CD4-CD8-，偶爾可見到CD4-CD8dim。多數CD3-LGL擴張為CD16+CD56+，而CD57的表達多變。

侵襲性NK細胞白血病

一種罕見的NK細胞系統性增生為特徵的疾病，亞洲人居多。患者多為青少年或青年(中位年齡39歲)。儘管沒有可信的證據表明侵襲性NK細胞白血病與結節外鼻型NK/T細胞淋巴瘤直接相關，但是它們的免疫表型相同。腫瘤細胞表達CD2,CD7,CD16,CD38,CD56和HLA-DR。CD3,CD4和CD5不表達。而CD8,CD11b和CD57的表達多變。由於腫瘤細胞是CD3-，因此沒有TCR基因的重排，但是在很多病人中可檢測到EB病毒的基因組，也有報道許多染色體異常的病例。

成人T細胞白血病/淋巴瘤(ATLL)

ATLL細胞形態上有差異，但是急性型ATLL的多形淋巴細胞有特殊的腦回狀和多葉狀細胞核。與之相比，慢性型ATLL細胞較小，多葉狀核也不明顯。不同亞型的ATLL的免疫表型特徵相同，表達CD2,CD3和CD5，不表達CD7。CD25高表達，大多數病例為CD4+CD8-，極少數病例為CD4-CD8+，CD4+CD8+或CD4-CD8-。

肝脾T細胞淋巴瘤(HSTL)

形態上，腫瘤淋巴細胞很普通，很少的無顆粒胞漿和不明顯的核仁。表型上，CD3+的腫瘤T細胞特徵性表達TCRδ1，而TCRαβ不表達。一般CD2+CD5-CD7+。另外，多數病例為CD4-CD8-，極少數病例為CD4-CD8+。NK細胞相關的CD16和CD56也經常有表達。

塞扎里綜合征(SS)

形態上，Sezary細胞減小或中等大小的淋巴細胞，腦形狀細胞核，染色質凝集成團，核仁不明顯。多數患者的絕對白細胞計數只有中等程度的增高，只有極少數患者有明顯的白細胞增多現象。免疫表型上，多數為CD3+CD4+CD5+CD7-CD8-，而CD4-CD8+罕見。

血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤(AITL)

免疫表型上，AITL的克隆性T細胞一般表達CD2,CD3,CD4,CD5,CD38和CD45RO，但是缺乏CD7,CD8和CD56。某些患者中CD3和CD4可不表達或微量表達。由於需要區分惡性AITL細胞和共存的非腫瘤T細胞(靜息的CD4+和活化的CD8+)以及多克隆B細胞，因此，免疫表型分析比較複雜，而AITL患者結節和外周血腫瘤T細胞一般表達CD10，這有助於免疫分型。用流式細胞和免疫組化方法也可在反應性淋巴組織增生中發現CD10的表達，這說明CD10+表型支持了AITL是從濾泡T細胞來源的，而不是代表腫瘤相關的異常抗原。CD10+可幫助區分AITL和其他外周T細胞淋巴瘤(PTCL)，也可區分外周血中正常和腫瘤T細胞。

CDS: 定製設計服務

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結語

近年來白血病的免疫分型已成為診斷血液惡性腫瘤不可缺少的重要標準之一。流式細胞術以其快速、多參數、能客觀定性又定量測定細胞膜、漿、核的抗原表達等特點成為了目前白血病免疫分型的公認的方法。一直以來，貝克曼庫爾特都致力於為了人類的健康產業的發展貢獻自己的力量。從上個世紀開始，我公司就一直為白血病的免疫分型提供最新的儀器，從XL到FC500，再到如今全球最新的3激光十色的臨床流式細胞儀Navios，貝克曼庫爾特在這30年里同時開發了最優質的診斷試劑，並且提供個性化的試劑定製服務，一如既往，為臨床診斷提供便利。

本專題所有內容由貝克曼庫爾特商貿（中國）有限公司

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