肺細胞中的let一7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌．研究人員利用基因工程技術將let一7基因導入肺癌細胞實現表達增強後，發現肺癌細胞的增殖受到抑制．該基因工程

（1）進行過程①時，需用 限制性核酸內切酶酶切開載體以插入let一7基因．進行過程②時，需用 胰蛋白酶處理貼附在培養皿壁上的細胞，以利於細胞培養．採用PCR技術擴增let一7基因時，在PCR反應體系的主要成分應包含：擴增緩衝液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高溫的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在該反應體系中，目的基因擴增了5代，則具有引物I的DNA所佔的比例理論上為 31/32．（2）研究發現，let一7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2．據圖分析，可從細胞中提取 RNA進行分子雜交，以直接檢測1et一7基因是否轉錄．肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由於細胞中 RAS蛋白質（RASmRNA/RAS蛋白質）含量減少引起的．（3）現有一長度為1000鹼基對（bp）的DNA分子，用限制酶切開後得到仍是長度為1000bp的DNA分子，說明此DNA分子的形態為 環狀．（4）某線性DNA分子分別用限制酶HindⅢ和SmaI處理，然後用這兩種酶同時處理，得到如下片段（kb為千個鹼基對）：

可以推知限制酶HindⅢ和SmaI在此DNA分子中分別有 1、1個識別序列．兩酶同時處理後得到的片段，再用限制酶EcoRI處理，結果導致凝膠上3.0kb的片段消失，產生一種1.5kb的新片段；那麼如果用限制酶HindⅢ和EcoRI將該線性DNA分子進行切割，則可得到長度分別為 2.5kb、1.5kb、3.5kb的片段．考點：基因工程的應用． 分析：分析題圖：圖1表示利用基因工程技術將let一7基因導入肺癌細胞的流程，其中①表示基因表達載體的構建過程；②表示用胰蛋白酶處理組織細胞，使之成為單個細胞，再加細胞懸液進行細胞培養的過程．圖2表示let一7基因影響癌基因RAS的表達的機理，let一7基因是通過影響轉錄來影響癌基因RAS表達的．分析表格：分別用限制酶HindⅢ和Sma I處理後得到的都只有2個片段，同時用限制酶HindⅢ和Sma I處理後得到3個片段，說明這個DNA分子中都只有1個它們的酶切位點．解答：解：（1）基因工程中用到的基因剪刀是限制性核酸內切酶．要將組織細胞分散開需用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理．目的基因擴增了5代，共得到32個DNA分子，除了含有模板DNA鏈的1個DNA分子外，其餘的DNA分子都含有引物I，因此佔31/32．（2）由圖2可以看出let一7基因是通過影響轉錄來影響癌基因RAS表達的，因此從細胞中提取RNA進行分子雜交，以直接檢測1et一7基因是否轉錄．影響轉錄後RAS蛋白質不能合成，含量會減少．（3）一長度為1000鹼基對（bp）的DNA分子，用限制酶切開後得到仍是長度為1000bp的一個DNA分子，說明該DNA分子是環狀的．（4）由表格信息可知分別用限制酶HindⅢ和Sma I處理後得到的都只有2個片段，說明這個DNA分子中都只有1個它們的酶切位點．限制酶EcoR I處理，凝膠上3.0 kb的片段消失，產生一種1.5 kb的新片段，說明在這段DNA正中間含有一個EcoR I酶酶切位點，綜合表格信息可知該DNA片段共有7.7kb，在2.5kb處有HindⅢ酶切位點，在5.5kb處有Sma I酶切位點，在4.0kb處有EcoR I酶切位點，因此用限制酶HindⅢ和EcoR I將該線性DNA分子進行切割，可得到2.5 kb、1.5 kb、3.5 kb的片段．故答案：（1）限制性核酸內切酶胰蛋白31/32（2）RNARAS蛋白質（3）環狀（4）1、12.5kb、1.5kb、3.5kb點評：本題結合圖表，考查基因工程的相關知識，意在考查考生分析圖表提取有效信息的能力；能理解所學知識要點，把握知識間內在聯繫的能力；能運用所學知識，對生物學問題作出準確判斷和得出正確結論的能力．聲明：本試題解析著作權屬菁優網所有，未經書面同意，不得複製發布。答題：215602779老師　日期：2013年11月2日
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