針對可怕的「小頭病毒」，這個候選疫苗希望大大的

06-29

寨卡候選疫苗在非人靈長類身上也顯示出全面保護效果

Vigorous Cooler，軸，亂，頑。微信公眾號：SX_virology，不定時輸出乾貨。

本文為 Article 的解讀。

了解文章的思路需要一點疫苗研究的基本知識，簡要做個提示如下；

【1】免疫應答

免疫應答主要分為兩大類，先天免疫和後天適應性免疫；其中適應性免疫又分為兩類：體液免疫和細胞免疫，體液免疫就是通過產生中和抗體，中和外來的病毒達到保護作用；細胞免疫是機體產生的能夠把病毒正在複製的細胞摧毀的免疫。一般情況下滅活疫苗只有體液免疫，減毒活疫苗既有體液免疫也有細胞免疫。

【2】疫苗

我們知道疫苗主要分為滅活疫苗和減毒活疫苗，這是最基礎的兩大類，這兩類之外的統稱新型疫苗，包括但不限於核酸疫苗，亞單位疫苗，基因工程疫苗，重組載體疫苗等等。

滅活疫苗就是通過物理、化學的手段將病毒滅活後直接製成的疫苗，最早證實滅活疫苗也具有保護效果的是 Salk 博士製成的脊髓灰質炎病毒滅活疫苗在美國大規模接種中顯示出良好的保護效果；

減毒活疫苗，就是通過各種手段拿到了毒力減弱的病毒或細菌，用作疫苗就是減毒苗。比如現在已經成為歷史的「糖丸」就是脊髓灰質炎病毒的三價減毒苗，細菌上有抵抗結核病的大名鼎鼎的卡介苗（BCG）；

亞單位疫苗：使用病毒某一種表明的蛋白質抗原直接作為免疫原，可以誘導機體產生中和抗體，比如乙肝病毒的表面抗原就可以直接作為一種亞單位疫苗；

基因工程疫苗：其實跟亞單位疫苗差不多，但是拿到病毒亞單位的手段是通過基因工程，比如通過構建表達乙肝病毒表明抗原的質粒轉入酵母中，表達產生表面抗原 HBsAg，純化以後就是乙肝疫苗，現在我國計劃免疫使用的乙肝疫苗就是這麼來的。還有最近新上市的 HPV 的疫苗是病毒樣顆粒（VLP）疫苗，也屬於此類。

核酸疫苗：主要是 DNA 疫苗，與基因工程疫苗不同的是直接將構建好的可以表達病毒抗原的質粒載體直接導入人體，現有的方式有「基因槍」（很小巧，低痛 / 無痛），這樣質粒可以在人體中直接表達病毒的抗原，機體識別以後就可以產生針對這些病毒抗原的中和抗體。還有一點，因為是機體自己的細胞表達的病毒抗原，所以DNA 疫苗同時還可以誘導細胞免疫應答。

重組載體疫苗：就是利用現有的減毒疫苗作為載體，外源表達新的病毒抗原進而達到保護新的病毒疾病感染的目的。上一篇文章說的最近 FDA 批准的埃博拉疫苗就是這一種，詳細可以參考專欄文章（埃博拉疫苗獲 FDA 突破性療法認定及疫苗信息詳解）。

今天解讀的文章使用了三種類型的疫苗，分別是滅活疫苗、DNA 疫苗和重組載體疫苗。

了解文章的思路除了需要一點疫苗的知識外，還需要對寨卡病毒有一丁點的了解，再簡要做個提示如下；

關注這種病毒的讀者可能還有印象，寨卡病毒屬於黃病毒科黃病毒屬，跟登革病毒、HCV是同一一類的病毒，所以結構類似——在病毒的表面的基本結構單元是由兩個 E 蛋白組成的二聚體（右側紅框里，紅色箭頭指向），E 就是包膜蛋白 Env；此外還有 M 蛋白，M 代表的是膜蛋白，在黃病毒生活周期中起到保護病毒的作用，所以最開始是原始的 M 蛋白，叫 prM。病毒成熟釋放以後 prM 會被切割，丟掉 pr，只剩下 M；E 和 M 是通過衣殼蛋白 C（Cap）形成結構的，圓圓的病毒裡面裝的就是病毒的核酸了，如想進一步了解黃病毒的生活周期可以移步我的回答（https://www.zhihu.com/question/38098852/answer/74975811），這裡面介紹了 HCV 的生活周期，寨卡和 HCV 大同小異。

到這裡我們就應該知道，如果要產生對寨卡病毒的免疫力，疫苗應該誘導產生針對寨卡 E 蛋白的中和抗體，確認這一點後我們來看文章。

鋪墊這麼長，終於開始了——

這篇文章的基礎是作者使用的三種疫苗（滅活疫苗 PIV、DNA 疫苗和腺病毒載體疫苗）在小鼠身上顯示出了不錯的保護效果，但是病毒攻擊的時候是在小鼠身上適應過的病毒，所以這一次他們直接看非人靈長類上他們疫苗的保護效果，用的實驗動物是恆河猴。

【1】免疫程序，滅活疫苗和 DNA 疫苗都是兩次免疫，第一次免疫時間算第 0 周，4 周后加強一次，再 4 周后用病毒攻擊。腺病毒載體疫苗只接種一次，4 周后直接病毒攻擊。

【2】用 5 微克 ZIKV 滅活疫苗（PIV）在 0， 4 周 (紅箭頭)免疫後，測量的針對 E 蛋白的 ELISA 中和滴度（Lg）何 ZKIV 病毒特異性抗體的微量中和效價 (Lg)，中位數為（紅色杠杠表示中位數）。同時測量了 PBMC（外周血單核細胞）分泌伽馬乾擾素的能力（使用的檢測方法叫 ELISpot，分泌伽馬乾擾素的就會被記錄成一個點，點越多表示分泌干擾素的能力越強，表明 Th1型免疫效果越好）。

這個圖的結論就是第一次免疫後（2 周）的兩種中和效價都有所上升，但不是很高，加強免疫後（6/8 周測量）水平都上來了。同樣，第 2 周比第 6 周干擾素的水平要低很多。

【3】我們現在使用的滅活疫苗都要添加佐劑，成分就是氫氧化鋁和幾種鋁鹽，簡稱鋁（Alum）。所以作者使用了僅有佐劑的組別作為對照。下面圖示的是在疫苗免疫之後的恆河猴進行病毒攻擊，在不同的體液中測量病毒 RNA 的拷貝數，能夠看到對照組的血漿、尿液和腦脊液中的病毒的數量有一個明顯的增高後降低的過程，但是滅活疫苗組就沒有。說明疫苗完全保護了恆河猴免受病毒的複製。同樣，右側是結腸和宮頸的分泌物，對照組中在 3 天后開始有病毒分泌，但疫苗組還是沒有，效果還挺贊的。

【4】再往後，作者就評價了使用疫苗免疫之後的恆河猴體內的中和抗體是不是具有被動的保護作用，也就是把這些抗體提純之後是不是也能起到保護動物的作用（電影《恐怖地帶》里找到原始的猴子就是為了它的血清，血清里有中和抗體）。

A 和 B 是測量的中和滴度，作者進行 5 倍的梯度稀釋（I, II, III, IV），可以看到效價是逐步減少的，加上對照（Sham），C 圖顯示了用這些梯度稀釋的抗體注射到小鼠後，再進行病毒攻擊，測量的病毒拷貝數，I, II 完全保護了；III 部分保護，高峰拷貝數低於對照組。所以疫苗誘導猴子產生的抗體是有顯著的中和效果的。D 和 E 是做了一個統計學分析。