腫瘤的細胞免疫治療

(2013-05-01 16:32:13)標籤：白血病患者腫瘤生物治療ciklak健康分類：科技近年來，腫瘤的常規治療方法均取得了很大改進，患者的長期存活率有所提高。手術、放射治療和化學治療能治癒部分腫瘤患者，但由於不能殺死全部腫瘤細胞，多數患者仍不能免於複發或轉移的發生。作為現代腫瘤治療的第4 種模式，以調動機體的免疫功能來清除腫瘤微小殘留病灶或明顯抑制腫瘤細胞增殖為基礎的腫瘤免疫治療，被越來越多的患者接受。現代腫瘤免疫治療可以追溯到19 世紀末期，紐約紀念醫院的外科醫生Coley 嘗試通過向腫瘤內部注射滅活的鏈球菌「Coley 疫苗」，以期消滅惡性腫瘤細胞。由於未能進一步深入了解免疫系統，腫瘤的免疫治療在此後的幾十年中進展較慢。近二十年來，隨著免疫反應在分子水平上的深入研究，目前腫瘤的免疫治療已經成為國內外研究的熱點之一。腫瘤免疫治療的方案較多，主要有腫瘤疫苗和腫瘤的過繼細胞免疫療法等。儘管目前大多數腫瘤疫苗的療效不盡如人意，但2010 年4 月29 日，FDA 批准了首個癌症治療疫苗Provenge 用於晚期前列腺癌的治療，使該葯成為第一個在美國被批准用於治療腫瘤的疫苗，開創了腫瘤免疫治療的新時代。而且，隨著高免疫原性的腫瘤抗原、新的抗原載體、免疫佐劑的研究進展以及和放、化療結合，使得腫瘤疫苗越來越有希望在臨床上得到廣泛應用。腫瘤的過繼細胞免疫療法主要是從腫瘤患者中分離免疫活性細胞，在體外進行擴增和功能鑒定，然後回輸給患者。該療法已經在腫瘤的臨床試驗中取得了較好的效果。腫瘤的過繼細胞免疫治療主要包括非特異性免疫治療和特異性免疫治療。作者就腫瘤治療中常用的過繼細胞免疫治療的現狀作一總結和展望。1 非特異性的腫瘤過繼免疫治療1． 1 淋巴因子激活的殺傷細胞( lymphokine activatedkiller，LAK) 療法LAK 療法是美國國立衛生研究院Steven Rosenberg 21 世紀80 年代初建立的一種免疫療法，利用白細胞介素2( IL-2) 刺激外周血淋巴細胞免疫活性細胞，這些細胞主要是由很多種淋巴細胞組成的混合體，包括NK 細胞和T 淋巴細胞，在體外對腫瘤具HLA非依賴型的殺傷作用，LAK 細胞殺傷靶細胞的機制與NK 細胞類似，可以通過細胞與細胞接觸識別靶細胞表面結構，也可以通過分泌細胞因子參與殺傷腫瘤細胞。日本的臨床試驗表明，LAK 聯合化療或放療可延長晚期肺癌患者5 a 生存率。美國國立衛生研究院的臨床試驗結果表明，LAK 細胞的抗腫瘤臨床治療效果不盡如人意。LAK 細胞需大劑量IL-2 誘導，費用高且毒副反應大，可重複性低，且LAK 細胞不能特異性聚集在腫瘤細胞表面，限制了其臨床應用。1． 2 細胞因子介導的殺傷細胞( cytokine inducedkiller，CIK) 療法CIK 是體外用IFN-γ、CD3 單抗、IL-2 或IL-1 等誘導活化的一群異質性細胞，1991年，Sctmfidtwolf 等首先報道了CIK 細胞，CIK 細胞是NK細胞樣T 淋巴細胞，該細胞同時表達T 細胞表面標記的CD3 和NK 細胞表面標記的CD56，兼具有T 淋巴細胞的抗瘤活性和NK 細胞非MHC 限制殺瘤特點，CIK 細胞殺瘤活性明顯優於LAK 細胞。吳昌平等關於化療聯合CIK 治療早期非小細胞肺癌的相關研究顯示，對比單純化療組，化療聯合CIK 生物治療組的免疫功能得到了改善，生存質量得到了提高，聯合治療組疾病控制率明顯高於對照組，聯合治療組無進展生存期及總生存期延長，未觀察到嚴重的毒副反應。牛奇等用臍帶血製備CIK 並聯合化療治療晚期實體瘤顯示，該療法可以明顯延長患者的生存期。CIK 細胞由於來源於患者或健康人的外周血，培養擴增相對容易，目前已經進行了大量臨床實驗治療多種腫瘤，如腎癌、何杰金淋巴瘤和非何杰金淋巴瘤、白血病以及肝癌等［，王士勇等發現重組人纖維連接蛋白誘導的CIK 細胞擴增倍數為傳統方法的2． 0 ～ 3． 5 倍，分泌IFN-γ的細胞比例、釋放顆粒酶B 的陽性細胞比例較誘導前明顯增加。與LAK 細胞相比，CIK 細胞增殖速度更快，殺瘤活性更高，殺瘤譜更廣，且對多重耐葯腫瘤細胞同樣敏感，對正常骨髓造血前體細胞毒性小，能抵抗腫瘤細胞引發的效應細胞Fas-FasL 凋亡等特點。2 特異性的腫瘤過繼免疫治療2． 1 腫瘤浸潤性淋巴細胞( tumor infiltrating lymphocytes，TIL) TIL 是從腫瘤組織中分離出來的淋巴細胞，經離體培養，由IL-2 誘導而成，具有特異性腫瘤殺傷活性。其主要來源為手術切除所獲得的實體腫瘤組織和浸潤淋巴結等，癌性胸/腹水也可以分離出TIL。由於TIL 比LAK 和CIK 具有更強的腫瘤特異性，目前是國際上研究和應用的主要免疫療法。Rosenberg 等首次應用TIL 治療20 例轉移性黑色素瘤，取得了較好的療效Kradin 等應用111 In 標記的TIL 對7 例原發於肺的轉移性腺癌進行治療，部分患者在輸入111 In-TIL 48 h 後作瘤組織活檢，發現放射活性大多集中於腫瘤組織，與周圍正常組織之比為3． 2∶ 1，這表明TIL 的靶向作用較強。Dudley 等報道在TIL 回輸前給予非清髓性化學藥物治療，有50% 的患者接受TIL 後出現預期的臨床效果; 如果在非清髓性化學藥物治療後再給予一次性的全身放療照射，其中72% 的晚期腫瘤患者出現良好的臨床效果。化療和放療可以殺死腫瘤細胞並釋放腫瘤抗原，可以清除患者體內的免疫抑制細胞，而且可以使腸道細菌進入組織釋放出Toll 樣受體，誘導樹突細胞的成熟，呈遞抗原，這些因素使回輸的TIL 在體內更好地發揮作用。因此，細胞過繼免疫治療結合放化療，可以有效地提高細胞治療的臨床效果。Goff 等分析顯示，淋巴結和肺組織來源的TIL 較胃腸道來源的TIL 在具有更高的生長活性和腫瘤特異性，腫塊直徑較大或淋巴細胞比率較高的組織中TIL 增殖較快，且特異性活性較強。Kilic 等對TIL 密度與非小細胞肺癌患者複發和生存期之間的關係作了相關研究，結果顯示，在腫瘤直徑≥5 cm 的患者中，TIL 密度較高組腫瘤複發率較低，5a 無病生存率較長，而在腫瘤直徑＜ 5cm 的患者中TIL 密度與腫瘤複發率無明顯相關性。Ruffini 等研究證實TIL 在非小細胞肺癌中密度較高，而在神經內分泌瘤中罕見; 在肺腺癌、鱗狀細胞癌及大細胞肺癌中分布相似。TIL 具有較高的抗腫瘤特異性，其殺傷效率遠高於LAK 和CIK 細胞。但由於TIL 培養條件要求高，培養時間長，需要新鮮的腫瘤組織、癌性胸水或轉移淋巴結，而且不是所有病人標本均可培養出TIL，因此，限制了其臨床應用，有待進一步的研究。2． 2 T 細胞受體( T cell receptor，TCR) 基因治T 細胞對腫瘤抗原的識別主要是通過TCR 識別腫瘤細胞表面的HLA-肽複合物，因此，T 細胞對腫瘤抗原識別的特異性取決於T 細胞表面的TCR。利用分子生物學的手段克隆腫瘤特異性T 細胞的TCR，並通過構建含TCR 的病毒載體，把TCR 轉入正常的T 細胞中，使這些T 細胞因攜帶腫瘤特異性TCR 而成為特異性腫瘤殺傷細胞。1999 年，Nishimura等率先證實了這種設想的可能性，用編碼TCR的逆轉錄病毒載體轉染正常的外周血淋巴細胞來源的T 細胞，這些T 細胞可以很好的識別表達對應抗原的腫瘤細胞; 這些轉染的T 細胞有多種功能，如分泌細胞因子和直接溶解腫瘤細胞。近來的動物實驗證實，經TCR 轉染的T 細胞可以明顯抑制腫瘤的生長; 而且在實驗動物的成像分析中發現，這些轉染的T 細胞主要集中在腫瘤部位，說明了TCR 轉染的T 細胞所具有的腫瘤特異性。在已經進行的臨床試驗中，TCR 基因轉染的T 細胞過繼回輸可以介導腫瘤的消退，這些回輸的T 細胞可以在體內存活半年以上。目前TCR 基因治療的臨床有效率相對較低，尋找有效的腫瘤靶抗原、克隆高親和性的TCR 受體以及優化TCR 的轉化效率是目前的研究重點。2． 3 抗原特異的T 細胞克隆過繼治療1991 年，van der Bruggen 等鑒定出了第一個T 細胞克隆識別的人類腫瘤抗原，首次證實了人體內存在可以識別腫瘤抗原的T 細胞克隆，並鑒定出一個新型的腫瘤抗原。這種抗原表達在多種腫瘤細胞中，但除了精索細胞外不表達在正常的組織中，是很好的腫瘤靶抗原。近20 年來，多種腫瘤抗原已被鑒定出來，多數可以在免疫治療中作為T 細胞克隆的靶抗原。抗原特異的T 細胞克隆可來自TIL 和外周血，需要腫瘤抗原陽性的刺激細胞誘導產生腫瘤特異性T細胞克隆。腫瘤細胞和腫瘤抗原孵育的抗原呈遞細胞如樹突細胞等均可作為刺激細胞，誘導出的T 細胞克隆在IL-2 等細胞因子和飼養細胞的刺激下擴增到臨床級別數量。第一個用針對次要組織相容性抗原的T 細胞克隆白血病臨床實驗顯示，T 細胞克隆有較好的臨床療效，7例複發的白血病患者中有5例出現明顯好轉。腫瘤特異性CD4 + 和CD8 + T細胞克隆在臨床上也取得了較好的臨床效果。抗原特異的T 細胞克隆具有較高的親和性，具有細胞表型和抗原特異性方面的均一性，可以在體內外很好地識別腫瘤細胞。但由於對體外誘導和擴增技術要求較高，且一個T 細胞克隆只能識別單一腫瘤抗原，如果腫瘤細胞發生抗原丟失，這種克隆治療將失去臨床療效。隨著新型生物技術和細胞培養技術的開發和應用，T 細胞克隆的鑒定和多克隆的大量擴增越來越容易，為將來抗原特異的T 細胞克隆的臨床應用打下了良好的基礎。3 腫瘤細胞免疫治療的展望隨著腫瘤分子生物學、腫瘤免疫學、基因工程的深入研究，腫瘤的免疫治療在腫瘤治療方面取得了長足的進步。鑒於免疫細胞的特殊性，和其他療法相比，免疫治療是目前已知的惟一有望完全消滅腫瘤細胞的治療手段，也被越來越多的人所接受，但免疫治療還有很多理論和技術問題需要進一步研究和解決。目前，在腫瘤患者細胞免疫治療的臨床應用過程中，應根據患者的具體情況來決定治療手段和方法。在臨床，應用過程中應密切考慮和其他療法如化療和放療等相結合，以增強腫瘤的細胞免疫治療效果。隨著一些關鍵技術和問題的逐步解決，免疫治療必將成為腫瘤治療的重要方向。
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