雜合性缺失、純合性缺失、點突變的原理與檢測方法

雜合性缺失、純合性缺失、點突變的原理與檢測方法sunxjk：缺失，就是基因缺失，簡單地說是沒有了，實際上是不能表達某一蛋白了，或者乾脆少了這一個位置。雜合性缺失：實際就是雜合子，一對染色體上某一個染色體上基因缺失，與之配對的染色體上仍然存在。純合性缺失：實際就是純合子，一對染色體上兩個基因都缺失。根據這個基因的特點，表現出來的形狀完全不同，比如人類一些疾病就是這樣，如果這個缺失基因是隱性基因，雜合子或雜合性缺失會表現出來缺失。實際上這個基因不能繼續表達。因為隱性基因只能在純合子中表現（個別例外，如性染色體）。如果這個基因是顯性基因，那麼這種缺失可能不表現出來。因為顯性基因不僅在純合子中表現，在雜合子也表現。具體應用過程，雜合子可以通過回交等方式，獲得純合子。zhangyong2004： 一般來說，對於一個確定的基因要檢測在某種病中的突變情況，方法比較成熟，PCR-測序、PCR-SSCP、PCR-RFLP等。如果樣本量較少且你所研究的目的基因較小，採用PCR或RT-PCR的方法獲得目的片段後直接測序是很可行的方法（目前測序一個反應只有不到60元人民幣）；但如果樣本量較大且所研究的目的基因較大的話，直接測序可能費用較高，一般可採用PCR-SSCP、PCR-RFLP。不管採用哪種方法檢測基因的點突變都涉及到PCR擴增目的片段，因而涉及到引物設計，引物設計由你的研究材料、研究方法、目的基因等決定：如果你能得到患者的病灶部位組織材料的話（從這些材料中提取RNA），可根據基因的cDNA序列設計引物（如果目的基因太大，則需要設計多條引物；如果採用PCR-SSCP的方法檢測突變，則需要每200bp左右設計一對引物）；如果你只能獲得患者的血樣的話，就從血樣中提取基因組DNA，檢測基因突變時，必須每個外顯子設計一對引物，對於較大的外顯子，還需設計多條引物，當然如果採用PCR-SSCP的方法檢測突變，同樣需要在基因的外顯子上每200bp左右設計一對引物。如果你想檢測外顯子內含子之間的剪接位點突變，可根據目的基因所在的基因組序列設計引物。 對於缺失（雜合缺失或純合缺失）的檢測方法，一般來說，就是PCR或RT-PCR，然後進行普通的瓊脂糖凝膠電泳即可。首先根據缺失部位兩側設計一對引物，然後以基因組DNA或RNA為模板，進行PCR或RT-PCR擴增，普通的瓊脂糖凝膠電泳後，可通過擴增產物及大小直接判斷：只得到一條擴增產物且擴增產物與目的片段大小一致的患者，為不存在此部位缺失的患者；只得到一條擴增產物且擴增產物較小的患者，即為純合缺失；有2條擴增產物，一條與野生型大小相同，另一條與缺失的相同，即為雜合缺失。關於雜合性缺失的檢測vitzj：檢測雜合性缺失通常用定量熒光檢測str不同重複次數的峰值.如果兩個峰值之前的比例是1:1,說明一對等位基因都存在,未缺失;如果比值不是1:1,且差別比較大,說明可能有雜合性缺失;如果只有一個峰,有兩種可能:1.正常基因組是有兩個峰的,那麼有缺失.2.正常基因組只有一個重合峰,則看標本的峰是不是將近兩倍高,如果是說明是正常,如果峰值比較低,不到兩倍,那有可能是缺失,但這樣判斷不精確,通常需要換一個位點再看.vitzj：純合性缺失,就是染色體上的一對等位基因一起缺失;雜合性缺失,顧名思義就是只丟失了一條同源染色體上的基因,另一條還在,通常如果另一條上的基因突變或者甲基化了就使基因徹底不能表達,如果發生在抑癌基因上就可能導致腫瘤.檢測方法有FISH,str,和snpfish就不多說了,結果判斷簡潔明了,但貴,而且操作難度大.str一對同源染色體上同一str位點的重複次數不一定相同,pcr擴增str全長,再跑膠,如果出現兩條帶,就說明該str位點是雜合子,假如你在腫瘤細胞中只看到一條帶,那說明有雜合性缺失發生了.但如果該位點本來就是純合子,那該位點被認為是信息不夠豐富,需要結合其他位點來看,所以做str需要多個位點.從上面分析可以知道,如果沒有正常DNA做對照,就算你跑出來全都是單峰,也不能說明問題,萬一他就是個全純合子呢?以上說得是跑page膠的方法,用測序儀做會簡單些,但原理一樣的.結果判斷上面的帖子講了.snp原理也類似,不多說了自己的電腦不在身邊,只能大概相關地推薦你看看.Genome-Wide Genetic Characterization of Bladder Cancer: A Comparison of High-Density Single-Nucleotide Polymorphism Arrays and PCR-based Microsatellite Analysis這篇文章講到了檢測雜合性缺失比較常用的方法snp和str做snp可能需要MGB探針,會貴些,做str如果你有測序儀就比較方便.如果沒有的話就pcr再跑page膠,麻煩但很便宜kunkun2004：純合性缺失,就是染色體上的一對等位基因一起缺失;雜合性缺失,顧名思義就是只丟失了一條同源染色體上的基因,另一條還在,通常如果另一條上的基因突變或者甲基化了就使基因徹底不能表達,如果發生在抑癌基因上就可能導致腫瘤.這個說法不太準確吧，雜合性丟失，是指腫瘤基因組中特定染色體上的某種DNA多態標記的等位基因片段,由同一患者正常組織基因組的兩種變成一種，即等位基因型由雜合子變成純合子.而不是丟失了一條同源染色體的基因。其實這個也就是腫瘤發生學中的「二次突變學說」vitzj 所說的丟失了一條，一對抑癌基因丟失了其中之一，變成了雜合子，這是第一次突變，一般發生在出生前，後來再發生第二次突變時，就是雜合子變成了純合子，也就是雜合性缺失，抑癌基因缺失，與腫瘤的發生相關。
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