基因甲基化檢測(MSP,BSP，焦磷酸測序，LUMA，MassARRAY))服務報價/價格

基因甲基化檢測 甲基化是在DNA甲基轉移酶（DNA Methyltransferase, DNMT）催化作用下, 利用S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)提供甲基，在CpG二核苷酸中胞嘧***嘧***環的五號碳原子上加上甲基的共價修飾過程. DNA甲基化是表觀遺傳修飾的主要方式，它不改變DNA的一級結構，卻在細胞的發育、基因的表達、及基因組的穩定性中起著重要的作用。 CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現象，而啟動子CpG 島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機制。 因此，基因啟動子甲基化檢測在臨床診斷、藥物敏感性檢測、個性化治療等方面具有很高的應用價值。

一. MSP法：定性

該方法是檢測甲基化的經典方法，也是最早採用的基因甲基化檢測方法。方法是：通過兩對引物，分別對應甲基化序列和非甲基化序列，對重亞硫酸鹽轉化後的DNA進行PCR擴增，然後通過瓊脂糖凝膠電泳分析某個基因的甲基化情況。

圖1：MSP PCR產物電泳圖二. BSP（亞硫酸鹽測序法）：定量

該方法是通過PCR產物克隆測序，然後用甲基化分析軟體對測序序列與靶序列進行比對分析，可以得到如下數據：A. 測序序列與目的序列的相似度（）； B. C-T轉化效率（）； C. 目的片段中每個CG的甲基化情況（點狀圖）； D. 每個CG的甲基化率()；

圖2a：BSP點狀圖圖2b：BSP序列比對 三.焦***酸測序法：定量

在表觀遺傳學的DNA甲基化研究中，新一代的測序方法可得到大量的全基因組甲基化特徵數據，需要驗證其中特定靶序列與表觀遺傳修飾的生理相關性。此驗證過程較具挑戰性，因為甲基化位點的位置和頻率的微小改變也會帶來明顯的變化。焦***酸測序可在一次檢測中快速定量一個或多個甲基化位點，是理想的驗證方法。

因此該技術在表觀遺傳學研究中逐漸成為數據分析的金標準。

技術優勢：

Pyrosequencing 能測定鄰近CpG區域的單個甲基化水平，甚至包括測序的引物區域

啟動子序列中接近的不同CpG島的甲基化頻率計算

適用於新鮮冷凍，和石蠟包埋的樣本

不同的應用實驗可同時在一次運行中實現

PCR反應之後，1個小時內可同時平行分析96個樣本

應用實例：

四. LUMA法： 定量檢測全基因組DNA甲基化水平，而不具體於特定的基因。原理及方法如下：

基於在DNA甲基化分析中最常用的同裂酶對HpaII/MspI， Karimiet等人建立了全基因組DNA甲基化化學發光定量檢測技術（Luminometric methylation assay, LUMA）.該檢測方法以EcoRI作為內部參照。DNA將在兩個獨立酶切反應（MspI+EcoRI和HpaII+EcoRI）中消化。EcoRI酶切後在5』端留出-AATT-，而HpaII和MspI留出了-GC-序列。 然後採用焦***酸測序平台上的聚合酶擴增技術填充核苷酸到5』端。最後用數學公式計算出HpaII/MspI位點甲基化水平即量化為全基因組甲基化的百分比。結果計算方法如下：

MassARRAY技術平台甲基化定量分析服務應用領域：與多種生理或病理狀態相關，包括腫瘤、複雜疾病等的DNA甲基化定量分析.五. MassARRAY法MassARRAYEpiTYPER? DNA 甲基化分析技術結合了鹼基特異性酶切反應和MALDI-TOF 檢測原理用於DNA 甲基化定量分析。可實現多重CpG的分析檢測，是用於DNA 甲基化定量分析及在基因組任何區域或者候選基因中鑒定甲基化定量分析的首選方法。MassARRAY技術平台甲基化定量分析服務優勢優點高性能● 可分析覆蓋長達500bp 的多個CpG位點● 可檢測福爾馬林處理的石蠟組織高靈敏度● 精度高● 檢測低至5% 的甲基化水平（標準偏差: SD <>；實驗室間差異：SD <>）高性價比●可進行多重CpG位點分析● 無需後續驗證

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