液體活檢技術揭開腫瘤君的真「面目」

傳統腫瘤分子診斷技術，需要通過手術或穿刺獲取組織樣本，具有對病人產生創傷，無法進行動態監測等局限性。榮登MIT Technology Review 2015年度十大突破技術榜單的液體活檢技術，逐漸從科學研究走向了臨床診斷，在腫瘤診斷及治療中大放異彩。

「液體活檢」從血漿為代表的體液樣本獲得遊離核酸或細胞，進而應用於腫瘤早期診斷、靶向藥物的選擇以及動態療效監測等。得益於科學研究的深入和測序技術的發展，我們對血液的了解越來越深入，可得到的信息也更多。

到底是血液里的何種成分讓我們可以獲取更多的信息，這些信息會對臨床又有怎樣的幫助？在本文中，液體活檢革命的領導者QIAGEN分子診斷將帶您各個擊破。

ctDNA——蛛絲馬跡

Crowley, E. et al. Nat. Rev. Clin. Oncol. 2013

ctDNA（Circulating tumour DNA，循環腫瘤DNA）。ctDNA是cfDNA（cell-free DNA）的一種，一般來源於凋亡裂解的細胞。腫瘤細胞破裂釋放到血液中的遊離DNA，就是ctDNA。

多個研究表明，ctDNA的濃度與腫瘤的進展高度相關，因此我們可通過ctDNA來進行腫瘤的分期、預後評估，以及動態的耐葯監測。它所攜帶的腫瘤基因組信息可用於用藥指導，不僅取樣簡單，還能克服腫瘤組織在時間和空間上的異質性，展示更全面的信息。QIAGEN作為樣本製備與檢測的全球領先者，為您提供完整的ctDNA提取與檢測方案。

遊離核酸提取試劑盒——工欲善其事，必先利其器，ctDNA多為小片段核酸，在外周血中的含量是相當低的，如何對其進行有效的提取，是廣大用戶關注的問題。QIAGEN提供的QIAamp? Circulating Nucleic Acid Kit是遊離核酸提取的金標準，可達到250倍的濃縮，此外還有採用全自動磁珠法的QIAsymphony? Circulating Nucleic Acid Kit，為後續檢測保駕護航。

QIAGEN therascreen? EGFR RGQ PCR Kit——世界首個CE-IVD 認證的液體活檢EGFR 突變檢測試劑盒，用於NSCLC 患者吉非替尼（易瑞沙）伴隨診斷治療，通過IFUM（易瑞沙後續評估）大型伴隨診斷研究，在652例患者中血液與配對組織EGFR突變狀態的一致性達到94.3%，並使得15-20% 的無法獲取腫瘤組織樣本的病人從血液檢測中獲得靶向治療機會。

GeneReader 二代測序解決方案——目前全自動二代測序系統GeneReader NGS System應用範圍包括凱傑全新的Actionable Insights Tumor Panel，可檢測12個與乳腺癌、卵巢癌、結直腸癌、肺癌和黑色素瘤等癌症相關的基因，涵蓋多達1,250個基因突變，探索更深層次的腫瘤信息，將為QIAGEN液體活檢方案帶來新的突破。

CTC——邪惡排頭兵

CTC

隨著實體腫瘤的生長，在周圍微環境發生了特定的變化時，一部分腫瘤細胞將獲得異常的活動能力（上皮間質轉化，EMT）。這些細胞如同邪惡的尖兵，從原發腫瘤上脫落，在身體里尋找新的落腳點。搭乘血液快線的脫落腫瘤細胞被稱為循環腫瘤細胞（CTC， Circulating Tumor Cells）。

目前，CTC的計數可用於判斷預後以及複發檢測；對CTC進行單細胞測序，可指導腫瘤用藥、掌握癌症的動態變化，及時調整治療方案；從血液中分離出來的活體CTC，還可進行進一步培養，用於構建腫瘤研究模型等。

QIAGEN 的單細胞全基因組/ 全轉錄組擴增方案讓您輕鬆跨過樣本量低的限制，幫您深度解析CTC 內隱藏的信息：

REPLI-g? Single Cell Kit：採用改良的MDA 技術對單個細胞進行全基因組無偏差擴增，高度適合NGS 分析；

REPLI-g WTA Single Cell Kit：用於對從單個細胞中得到的RNA或mRNA進行無偏差的全轉錄組擴增；

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit：用於對從少量來源細胞同時進行全基因組/全轉錄組擴增。

Exosome——特戰小分隊

Exosome

除了CTC和ctDNA，exosome（外泌體）是液體活檢的新貴。外泌體是細胞分泌出的囊泡，包含的內容有蛋白質、DNA、信使RNA以及非編碼RNA，是細胞間溝通的載體。研究發現，腫瘤細胞釋放的外泌體的量較大，這些外泌體與腫瘤的發生、發展、轉移以及抗藥性有關。腫瘤細胞以外泌體為載體，迷惑免疫系統，從而逃過免疫系統的監視。外泌體不僅是通訊兵，也是工兵連，給腫瘤細胞的轉移指引方向的同時，也創造適合腫瘤生長的微環境。

外泌體攜帶的信息多樣化，其中的蛋白質和核酸，均可用於癌症的早診、複發監測、抗藥性監測等相關方面的分析。且外泌體在數量上多於CTC，更易富集；在形式上，分泌小泡能夠有效保護核酸類物質，克服了ctDNA在血液中容易降解的問題，在臨床應用上大有可為。

QIAGEN 最新推出的exoRNeasy Serum/Plasma Kits 採用Exosome Diagnostics, Inc. 公司的技術，取代了傳統的超速離心進行exosome分離的方法，通過離心柱和特製緩衝液，快速從血清/ 血漿中分離exosomes，之後使用QIAGEN 特有的高效技術分離包含miRNA 在內的總RNA。整個實驗流程，從血清/ 血漿樣本到RNA 產物，只需1 小時。

到此為止，QIAGEN帶您熟悉了液體活檢的三個檢測物：CTC 循環腫瘤細胞 / ctDNA 循環腫瘤DNA / Exosome 外泌體。那麼在液體活檢領域，還有哪些值得期待的新技術？QIAGEN又會提供哪些研究及診斷利器呢？歡迎繼續關注我們的後續文章。