四神丸化裁治療潰瘍性結腸炎的對比性實驗研究

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3 結果

　　3.1 病理學觀察及結腸損傷評分見表1。肉眼下可見模型組結腸黏膜明顯充血、水腫，中到重度糜爛和多個潰瘍，潰瘍呈圓形或橢圓形，底部乾淨，或可見少量淡黃色覆蓋物，邊緣充血水腫；鏡下可見黏膜糜爛脫落、充血水腫，炎症細胞浸潤，形成多個潰瘍缺損，結腸指數、結腸損傷評分及病理組織學評分明顯高於正常組（P＜0.01）；各治療組亦可見少量充血水腫和部分結腸可見輕度糜爛和潰瘍，鏡下可見潰瘍數目明顯減少，底部可見纖維結締組織增生，充血水腫明顯減輕，伴少量炎症細胞浸潤，與模型組比較結腸指數、結腸損傷評分及病理組織學評分明顯下降並具有統計學意義（P＜0.05）。同時，四神丸與加味四神丸兩組之間比較無顯著性差異，提示四神丸及加味四神丸均可明顯緩解結腸損傷局部充血水腫，減輕炎症細胞浸潤程度，減少潰瘍數目，促進結腸上皮損傷修復、潰瘍癒合。表1 結腸黏膜損傷修復情況（略）與正常組比較，P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05；與四神丸組比較,*P＜0.05；n=10

　　3.2 結腸上皮細胞凋亡情況見表1。結腸上皮細胞凋亡水平可見模型組較正常組明顯升高（P＜0.01），而各治療組與模型組比較，其結腸上皮細胞凋亡率明顯下降（P＜0.01或P＜0.05）。同時加味四神丸組與四神丸之間比較，加味四神丸降低結腸上皮細胞凋亡率明顯優於四神丸(P＜0.05），提示四神丸及加味四神丸均可明顯抑制結腸上皮細胞凋亡速度，減輕損傷程度，且加味四神丸優於四神丸組。

　　3.3 結腸局部細胞因子表達水平見表2。結腸局部組織勻漿細胞因子水平可見，模型組TNF-α，PAF表達水平明顯高於正常組（P＜0.01或P＜0.05），而IL-10，TGF-β表達水平均明顯低於正常組，給葯10 d後，與模型組比較，四神丸組明顯升高TGF-β水平外（P＜0.01），對TNF-α，PAF，IL-10表達作用不明顯，或僅有作用趨勢，而無統計學意義。而加味四神丸與模型組比較，降低TNF-α，PAF表達、升高TGF-β水平較明顯（P＜0.01或P＜0.05），同時，四神丸與加味四神丸之間比較，可見加味四神丸降低TNF-α，PAF表達，升高IL-10水平明顯優於四神丸組（P＜0.05），但升高TGF-β水平則無統計學意義。

　　4 討論

潰瘍性結腸炎是一種不明病因的炎症性結腸疾病。宏觀上，幾乎各種證型都不同程度存在著淤血狀態；微觀上，均有血液流變學的改變［7］。王長洪提出UC病人不論病史長短、癥狀輕重、緩解或發作，主訴均為腹痛、腹瀉、黏液膿血便，結腸鏡檢查黏膜充血、水腫，甚至出現糜爛、潰瘍、出血，腸黏膜活檢病理組織學常見大量血栓形成，均與中醫的「血淤」之證吻合，強調UC總的病機特點應歸納為「淤滯」，病理特徵是虛中夾實，並貫穿於疾病的全過程［8］。根據久病成虛和久病成淤的理論，UC日久，其病機發展以脾腎虧虛為本的病理狀態，同時兼夾淤血凝滯，故而治療上可見溫補脾腎法和活血化淤法聯合使用。如何勝國等［3］採用溫陽活血法治療非特異性UC患者34例，結果有效率為97.06%，效果顯著。表2 結腸組織勻漿細胞因子的表達（略）與正常組比較，P＜0.01，P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05；與四神丸組比較,*P＜0.05；n=10

現代研究表明，潰瘍性結腸炎患者體內存在血液高凝狀態［9］，提示高凝狀態的形成可能是UC的重要發病特徵之一。潰瘍性結腸炎患者外周血和患病局部均存在血液濃稠性、聚集性、黏滯性增高，血液循環減慢，導致腸黏膜血液灌流減少，細胞缺血、缺氧，進而引起腸黏膜組織損傷［7］。高凝狀態的形成與PAF（Platelet Activating Factor，PFA）的活化有密切的關係，PAF在潰瘍性結腸炎的發病過程中起關鍵性作用，可潛在性刺激前炎症因子的產生和增加炎症細胞［10］。Ko等［11］研究發現，PAF與靶細胞表面受體結合後激活核因子NF-κB而上調IL-1，TNF-α的合成和分泌。IL-1，TNF-α作為一級炎症因子，又刺激多種炎症細胞合成PAF。PAF還可顯著性促進CD4T細胞增殖，調節T淋巴細胞亞群之間的平衡，趨化T淋巴細胞，且可降低SIgA水平，損害腸黏膜的免疫屏障功能［12］。CD4T細胞已經被確定作為潰瘍性結腸炎的致病性T細胞，它是通過Th1或Th2通路引發腸道炎症的［13］。前者能產生大量的IL-2，IFN-γ等；後者Th2細胞則可產生IL-4，IL-5等細胞因子，從而活化B細胞，產生中和抗體和IgE。血小板活化因子激活後，釋放或促進大量炎症因子的分泌，引起血小板的黏附和聚集，或作為炎症介質，或調節免疫功能，直接或間接參與腸道黏膜的損傷，最終引起UC患者體內血液的高凝狀態的形成，因此，PAF廣泛的參與了潰瘍性結腸炎的多個發病關鍵環節，形成以血小板活化因子為中心，以炎症介質、免疫異常為網路，導致高凝狀態，引起結腸局部血管內皮損傷，結腸局部組織細胞缺血缺氧，最終導致結腸黏膜變性壞死，形成潰瘍。

本實驗中，模型組TNF-α、PAF表達水平明顯高於正常組，而IL-10、TGF-β表達水平均明顯低於正常組，與相關報道較一致。加味四神丸則可顯著降低TNF-α、PAF表達、升高TGF-β水平較明顯，表明活血理腸丸可能抑制血小板活化因子的活化，進而調節抗炎因子和促炎因子平衡，減輕炎症損傷，促進黏膜修復、潰瘍癒合。而四神丸則明顯升高TGF-β表達水平，表明四神丸可有效治療潰瘍性結腸炎的途徑可能是通過升高TGF-β表達水平，由此抑制單核細胞及T細胞等細胞的活性，減少TNF-a等促炎因子的分泌，促進上皮細胞修復，減少上皮細胞凋亡的速度，加速潰瘍癒合。二者均有效治療潰瘍性結腸炎，但二者作用的可能機制不同，臨床使用時宜根據患者血凝狀態程度和辨證論治加以選擇。