【技巧】Elisa特殊樣本處理

05-21

【技巧】Elisa特殊樣本處理

上一期，給大家介紹了Elisa常見樣本處理方法。本期將繼續延續這個話題，給大家分享關於Elisa特殊樣本處理方法。

雲克隆：【技巧】Elisa常見樣本處理?

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1. 痰液

選擇痰液中較為粘稠部分稱重，加於痰量兩倍的0.1%DTT(二硫蘇糖醇)，37℃ 恆溫水浴振蕩5min，再加入兩倍於痰量的PBS緩衝液繼續振蕩15-20min，150目的金屬絲網過濾，1,000×g離心10min吸取上清液-20℃或-80℃冷凍保存。

?2. 肺泡灌洗液

1,000×g離心20min，取上清即可檢測，或將上清置於-20℃或-80℃保存，但應避免反覆凍融。

3. 唾液

用唾液樣本採集管收集樣本，然後於2-8℃/ 1,000×g離心15min，取上清即可檢測，或分裝後於-20℃或-80℃保存。避免反覆凍融。

（注意：唾液一般飯後半小時內不易採集，因為剛進食的唾液中富含唾液澱粉酶，最好空腹時段採集。）

4.紅細胞裂解液

1）將全血於1,000×g離心20分鐘，棄上清收集細胞。

2）將收集的細胞用預冷的PBS（pH 7.0-7.2）洗滌三次。

3）用預冷的PBS重懸細胞，放於-20℃冷凍。然後融化細胞，輕輕混合。反覆凍融三次。

4）於2-8℃ 5,000×g離心10分鐘，除去細胞碎片。

5）取上清即可檢測，或將上清置於-20℃或-80℃保存，盡量避免反覆凍融。

5. 乳汁

將標本在2-8℃ 10,000×g離心15分鐘，收集水樣成份，每次離心兩次以上，重複3次即可檢測，或將上清置於-20℃或-80℃保存，避免反覆凍融。

6. 精漿

精液標本收集於無菌容器中，室溫或37℃水浴箱中液化。待精液完全液化後，將精液 4,000 rpm離心10分鐘分離精漿，即可做ELISA。

?7. 胸腹水

為防止標本採集時出現凝塊、細胞變性、細菌破壞自溶等，常規及細胞學檢查胸腹水宜用EDTA-K2 抗凝收集，生化標本宜用肝素抗凝收集。收集後即刻離心，2,500r/min離心5分鐘。取上清即可用於檢測，或將上清置於-20℃或-80℃保存。

8. 除了動物來源的樣本，還有植物樣本在檢測之前也需要進行相應的處理。在這裡我們選取了2種植物樣本收集處理方法，以供參考：

8.1 植物樣本中化學分子提取

1）取新鮮材料或貯存材料（用100％甲醇固定，放置-10℃冰箱中至待測時）1g，剪碎，加入6ml冰上預冷80％甲醇溶液，勻漿5min。

2）勻漿液在4℃下振蕩（或攪拌）24h，過濾。

3）殘渣再用2ml甲醇液振蕩1h。反覆二次，濾液混合。

4）將濾液在旋轉蒸發器上乾燥減壓蒸發（36～38℃）至2ml。

5）再加入1ml石油醚提取部分色素，棄掉石油醚層，取下層甲醇液層。

6）繼續減質濃縮至水溶液。在此水溶液中含有IAA、ABA、GA和CTK等。

8.2 植物樣本中蛋白質提取

1）根據樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據材料不同適當調整加入量），準備提取液放在冰上。

2）把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨後加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。

3）用離心機離心8，000rpm 40min（4℃）或11，100rpm 20min（4℃）。

4）提取上清夜，樣品製備完成。

高品質的試劑，精確的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。其中正確的操作不僅僅是指實驗操作，樣本的處理也是至關重要的。我們希望兩期關於樣本處理方法的專帖能夠有助於您的科研實驗。如果您對於具體實驗或者樣本處理還有疑問或者建議，也歡迎您和我們聯繫。