細胞學相關實驗（一）

來自專欄 細胞培養俱樂部

細胞培養

細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。通過細胞培養得到大量的細胞或其代謝產物。因為生物產品都是從細胞得來，所以可以說細胞培養技術是生物技術中最核心、最基礎的技術。相關過程主要包括以下三方面：

1 取材在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。

2 培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。

3 凍存及復甦 為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存通常是保存在－196℃的液氮，即將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。

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原代細胞分離

凡是來源於胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法製備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。

1 懸浮細胞的分離方法 組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，最簡單的方法是採用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心後由於各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收穫目的細胞。

2 實體組織材料的分離方法 對於實體組織材料，由於細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可採用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。

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細胞增殖檢測技術

目前主要有兩種用於檢測細胞增殖能力的方法。

1 直接法，通過直接測定進行分裂的細胞數來評價細胞的增殖能力。

2 間接法，即細胞活力（cell viability）檢測方法，通過檢測樣品中健康細胞的數目來評價細胞的增殖能力。細胞活力檢測法並不能最終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養條件下會自發啟動凋亡程序，但藥物的干擾可抑制凋亡的發生；這時若採用細胞活力檢測法，顯然可以區分兩種條件下的細胞數量，但我們並不能從藥物干擾組細胞數大於對照組的事實說明藥物可促進細胞增殖的結論。

所以最直接的證據應該採用方法1。

常用檢測方法：細胞計數法，CCK8檢測法 ，MTT檢測法，Brdu檢測法，Edu檢測法，平板克隆形成。

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細胞周期檢測技術

細胞周期指由細胞分裂結束到下一次細胞分裂結束所經歷的過程，所需的時間叫細胞周期時間。

常用檢測方法：流式檢測細胞周期，標記有絲分裂百分率法。

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細胞凋亡檢測

細胞凋亡是指為維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用；它並不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。細胞發生凋亡時，就像樹葉或花的自然凋落一樣，對於這種生物學觀察，借用希臘「Apoptosis」來表示，意思是像樹葉或花的自然凋落，可譯為細胞凋亡。

常用檢測方法：流式檢測細胞凋亡，線粒體膜電位，活性氧檢測，Hoechst染色，電鏡，TUNEL。

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細胞轉移能力檢測

細胞轉移能力檢測主要應用於腫瘤和血液學等方面的研究。

常用檢測方法：細胞劃痕實驗，Transwell實驗，Invasion實驗。

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其他實驗

細胞惡性程度：軟瓊脂實驗

細胞屏障：跨膜電阻、熒光黃透過率

細胞粘附實驗

細胞共培養實驗

原文地址：CellMax 細胞培養大課堂之 細胞學相關實驗（一）