微生物實驗室常用標準菌種的管理、保存SICOLAB

微生物實驗室常用標準菌種的管理、保存SICOLAB

在微生物實驗室中，常需保存-些實驗中常用的標準菌種及菌株，如金黃色葡萄球菌，致病性大腸桿菌，幾種常見的沙門氏菌，痢疾桿菌等，以供學生進行細菌塗片染色檢查、細菌接種培養、製備凝集抗原、免疫動物製備診斷血清及測定診斷血清效價等。在做抗菌藥物敏感試驗時，也需常備-套對各種抗菌藥物「敏感」的對照菌株，使學生學會判斷細菌對藥物的敏感性。對這些菌種的妥善保管和保存，是良好的實驗室管理和實驗質量的重要保證。

一、保管

由於實驗室中保存的菌種大多對人體具有致病性，經多次移種又易被污染和發生變異，做好安全及質量管理至關重要，主要應做到以下幾點。

1.1專人負責 菌種保管應指定專人負責，存放於加鎖的冰箱中。保管人應具備高度的責任心，明確職責，嚴格執行有關的規章制度，以確保菌種安全。

1.2詳細登記 實驗室應備有-本詳細登記本，對各種菌種進行詳細登記，內容包括菌種的名稱，編號，數量，分離日期，鑒定者，細菌的形態染色，培養生化特性，抗原結構，動物致病力等，並註明使用、移種及銷毀的情況和原因。

1.3定期移種 對菌種的保管不僅要求菌種不死，還要力求其生物學性狀等不發生變異。各種菌種應按規定時間定期移種。細菌在人工培養基上經數代培養後，其形態、菌落、毒力等均易發生變異，因此，在每移種3次後應做-次全面鑒定，檢測菌種有無污染和變異，如發現污染和變異時，應及時處理。

二、保存

保存菌種應根據細菌的培養特性、抵抗力等選擇適合的培養基，微生物實驗室常用菌種的-般保存方法有以下幾種：

2.1科面保存法

2.1.1普通肉湯瓊脂斜面：腸道桿菌、葡萄球菌等營養要求不高的細菌可接種於普通瓊脂斜面上，斜面底部應加少許無糖肉膏液，以防乾涸(但變形桿菌「OX」及傷寒桿菌「O』』菌株宜接種於斜面底部無肉湯的乾燥的瓊脂斜面，以防變異)，用橡皮塞塞緊，置37℃培養18-24h後，放於4℃冰箱中，可保存1個月，每經1個月需接種傳代1次。

2.1 .2血液瓊脂斜面：鏈球菌及肺炎球菌的營養要求較高，在普通培養基上生長不良或不生長，應接種於血液瓊脂斜面上，37℃培養生長後，放4℃冰箱保存，鏈球菌需半個月-1個月接種1次;肺炎球菌因能產生自溶酶而導致自溶現象，需4d移種1次。肺炎球菌在人工培養基上經數代培養後，其形態、菌落、毒力均易發生變異，在人工培養基上肺炎球菌很快失去莢膜，經多代培養後其光滑型菌落可變為粗糙型，毒力也大為降低。

2.1.3雞蛋斜面：成分為新鮮全蛋、1%葡萄糖肉湯及甘油。少數沙門氏菌當新從病人檢材中分離出來時，常具有Vi抗原，具有Vi抗原的細菌，有抵抗吞噬的作用，並保護細菌不被相應抗體在補體參與下所溶解，故毒力較強。含有Vi抗原的沙門氏菌等，可接種於雞蛋斜面上，37℃培養18-24h，加無菌液體石蠟至斜面浸沒，再超出約1cm，置4℃冰箱，可保存3-6個月，Vi抗原經長期人工培養，也易消失。

2.1.4呂氏血清斜面：白喉桿菌可保存在該培養基上，其成分為l%葡萄糖肉湯(pH7 .4)1份，牛血清或兔血清(無菌)3份。白喉桿菌在此培養基上生長迅速、旺盛，菌體形態典型，如在培養基中再加人5%-10%的中性甘油，則培養出的白喉桿菌的異染顆粒更為明顯，但24h後即衰老成為多形態，很少有異染顆粒，菌體粗大3-4倍，置4℃冰箱可保存2周-1個月。

2.2半固體穿刺保存法

2.2.1普通半固體：大腸桿菌、葡萄球菌、綠膿桿菌等可穿刺接種於普通半固體培養基內，37℃培養18-24h後，加1層無菌的液體石蠟，厚度約為1cm，置4℃冰箱可保存3-6個月。傳代移種時，將半固體菌種管傾斜，使液體石蠟流至-邊，再取菌移種於新的培養基。將沾有少數液體石蠟的接種環浸於95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起污染。

2.2.2 3.5%高鹽半固體：副溶血性弧菌可保存在該培養基中，此菌適應高濃度食鹽的環境，在不含食鹽的培養基上不生長。培養基含食鹽的濃度以3%-3.5%為最好。穿刺接種後，置37℃溫箱培養18-24h，在室溫下即可保存1個月。

2.3羅氏培養基

結核桿菌的營養要求較高，在培養基中需加人複雜的有機物如動物血清、雞蛋、馬鈴薯、氨基酸以及磷、硫、鉀、鎂等無機鹽類才能生長。結核桿菌的培養基種類很多，實驗室最常用的是羅氏培養基。該菌生長速度很慢，-般分裂速度為18hl代，37℃需培養2-3周，置4℃冰箱可保存2-3個月。

2.4厄肉培養基

將牛肉渣裝於試管中，高約3cm，並加人肉湯約srnL，比肉渣高1倍，在每管液面上加人已溶化的凡士林，高約0.scm，高壓滅菌後備用。破傷風桿菌等專性厭氧菌常保存在厄肉培養基內。使用時先將培養基置於水浴中煮沸10而n，以驅除管內存留的氧氣，然後將破傷風桿菌接種於肉渣培養基內，經37℃培養2-7d後，培養基呈輕度均勻混濁，肉渣部分消化，微變黑，產生少量氣體，4℃冰箱可保存2-3個月。

2.5砂管保存法

適用於有芽胞的細菌的保存，將過篩後的中性細砂烘乾，裝人小試管內約ICm高，橡皮塞塞緊，滅菌烘乾備用。用無菌生理鹽水洗下培養基上的細菌培養物，製成懸液。吸此菌液約O.smL注人砂管內，以砂土全部被浸濕為度。塞好管塞，放人乾燥器內抽干。然後放在裝有氯化鈣(吸水劑)的乾燥瓶內，置冰箱保存備用。需用菌種時，取-接種環砂土接種於適宜培養基上培養即可。

2.6普通培養基內保存法

將細菌的普通培養基生長物放於4℃冰箱或室溫冷暗處保存。用這種方法保存，只可保存數天，久之容易變異甚至死亡。-般只作暫時保存用。