【工具】非常簡單的extracellular staining

準備FACS buffer：500ml PBS+ 10ml FBS (2%) + 0.02% Na Azide + 0.1mM EDTA(optional)

找兩個這樣的tube：

• 準備細胞：
• 分別加入0.1-1 e6的細胞。
• 300g, 5min
• pour out sup.
• 加入一抗：
• 一個tube加入first antibody，用FACS buffer 稀釋，最終濃度是10ug/ml。
• 另一個tube加入isotype control，同樣濃度。
• ice, 30min
• 洗兩遍：
• 2ml FACS buffer, wash twice, pour out sup.
• 加入二抗：
• 加入100ul 10ug/ml 二抗
• ice, 30min
• 洗兩遍：
• 2ml FACS buffer, wash twice, pour out sup.
• 直接去test或者fix（留著一周內test）：
• add FACS buffer, ready for test
• or add 0.5ml PBS+2% formaldehyde, can be stored for a week.

總結下來就是：

準備細胞 --> 一抗30分鐘 --> 洗兩遍 --> 二抗30分鐘 --> 洗兩遍 --> test/fix

是不是很簡單呢？科科。

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