4個FAQ幫你全面了解免疫組化的抗原修復

抗原修復是公認的免疫組化比較關鍵的一個步驟，因為我們多使用福爾馬林或多聚甲醛溶液來固定組織。甲醛與蛋白質發生交聯反應，覆蓋抗原決定簇，極大的影響了我們的實驗結果，甚至時出現假陰性的現象。抗原修復過程是由少數主要影響因素和許多非主要因素共同影響的複雜過程（這是我總結的最複雜的語句哈哈！）。如何抽絲剝繭抓住主旨呢？這需要我們對抗原修復有一個整體的認識，以不變應萬變。下面通過幾個小問題，帶領大家去認識抗原修復:

Question 1：為什麼免疫組化要做抗原修復？

答：這位觀眾的問題很不錯！簡單直達要害。

我們為了得到更好的實驗結果，在免疫組化過程中會對樣品材料進行固定，一般常用的就是福爾馬林或者多聚甲醛溶液。科學研究已經證明甲醛的醛基與蛋白質發生交聯反應，不同程度的遮蔽了抗原表面的抗原決定簇，影響其與抗體結合。其發生交聯反應形成的究竟是什麼還沒有定論，有人說形成的是醛基，有人說形成的是羧甲基。但不管是什麼，都會使抗原表面的決定簇減少，影響實驗結果，甚至產生假陽性。當然如果您使用的是一些其他的固定液（非醛類）就不用抗原修復了。

Question 2：怎樣才能獲得理想的抗原修復結果呢？

答：我個人認為是主要有兩方面：一是抗原修復方法的選擇和修復液的搭配；二是操作人的手法和對實驗的理解程度。

總的來說，是個搭配並且需要摸索的過程。需要把握的是抗原修復的實質是選對方法，然後用高壓或者微波加熱的手段打開甲醛與蛋白質的交聯，也就是打開化學鍵的過程，你只要選對方法，通過溫度和時間的改變來控制強度，試驗並沒有想像的那麼難。

Question 3：所有經甲醛或者多聚甲醛固定的組織都需要進行抗原修復嗎？

答：絕大部分用甲醛固定的組織都需要進行抗原修復，但是也有例外。拿個中文文獻舉個例子《不同抗原修復法對免疫組化HBcAb染色結果》。它的結果恰恰是不修復的切片染色效果最好。推測的原因是HBcAg是乙肝病毒的殼結構蛋白，並非肝組織本身的，因而甲醛並不一定封閉它。相反的是如果你進行高壓熱修復，反而會讓未被封閉的蛋白變性，那實驗結果可想而知。（好像就沒聽說過學術界有保準的事，哈哈！）

Question 4：抗原修復的方法有幾種？如何來選擇呢？

答：抗原修復的方法主要分為三大類：

①高壓熱修復

②微波熱修復

③酶消化法

我們針對不同的抗原，採取不同的修復方法，取得較理想的染色效果。常用的免疫組化抗原修復主要有微波加熱修復法、高溫高壓修復法和酶消化修復法等方法，抗原修復液主要是枸櫞酸鹽緩衝液（pH=6.0）和EDTA緩衝液（pH=8.0或pH=9.0）。抗原修復的方法選擇，我們首先看抗原的定位，是位於細胞膜、細胞質還是細胞核。這三個位置的抗原修復難易程度排序：細胞質抗原>細胞膜抗原>細胞和抗原。

詳細的介紹你可以參照另外一篇文章《免疫組化抗原修復方法的選擇》

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