細胞培養之血清

每個做細胞實驗的天使都用過血清，每個天使都被血清的種種問題折磨成折翼！

每個實驗室都在流傳著某個師兄師姐細胞實驗重複不出來的傳說！

每個師弟師妹都被告誡血清惡魔般的殘忍！

每個搬磚的都應該明白，實驗最重要的不是能不能出預期結果，而是穩定！穩定的陽性，穩定的陰性結果結果都極具價值，實驗結果的不穩定是課題持續性的災難，你看韓老師說我這邊很穩定，你們國內外實驗室做不出來都是辣雞。。。

細胞相關實驗結果穩定性不佳，最重要的原因就在於惡魔，啊，不，血清的存在。細胞培養所用的培養基的發展大致可分3個階段：一是直接使用組織凝塊或提取液作為細胞的培養基（天然培養基）。二是現在廣泛採用的合成培養基(如DMEM、RPMl 1640等)，通常還需在其中添加如血清，細胞因子等補充物才能維持細胞生長。三是無血清培養基，此階段是我們努力的方向，打倒惡魔，全人工合成配方，但無血清培養基在現在還不能廣泛使用，因為很多原因，比如它很貴。。。還有其他的原因，以後再細說，那是另外一個故事。所以，我們現階段還不能擺脫血清的折磨，擺脫不了，那就了解它，然後享受它。。。

血清在細胞培養中提供細胞生長所需的生長因子、激素、各種蛋白、促進貼壁和鋪展的因子、細胞傳代時蛋白酶抑製劑和其他多種不明營養物質，以胎牛血清（FBS）的使用最為普遍，其他血清類型還包括小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等，其營養類型有很大差異，適用於不同類型細胞。由於血清含有促進細胞增殖和維持的大部分因子，它幾乎是通用的生長添加物，所以不需要為每一個細胞系優化培養基（這話有點絕對。。。），節省時間和精力，所以大家用的都很high！

但是，血清最大的劣勢就是不穩定！

（1）來源不穩定。以胎牛血清為例，懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開，取出胎牛，在低溫無菌條件下，刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條，動物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外，牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家，我國在對牛血清的質量《中國生物製品主要原輔料質控標準 2000》中提出比較嚴格的標準要求，包括蛋白質含量，細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素，細胞增殖支持等檢查。所以最近大家是不是很難買到GIBCO的血清了，別說你買到了，那是你沒走正規官網，別說你是走私的(快進局子了！)品質有保證，誰知道呢，價格還是正規的一半，有可能是京郊的。。。

（2）組分不穩定。還有最讓人鬧心的，動物血清成分複雜，其組分及含量常和動物性別（公胎牛，母胎牛，如激素）、年齡、生理狀態、營養條件不同而有差異，是不是覺得特像中藥。還有，儘管血清大部分成分是已知的，但仍然存在不清楚的組分，所以導致標準化極其困難。所以，師兄師姐經常會告訴你說，不同生產廠家的血清差異很大，就是同一廠家生產的不同批次血清差異也很大。

（3）用法不穩定。實驗習慣的不同，都可能導致細胞實驗結果的不穩定，比如，有人四度過夜融化，有人急性子，直接扔進水浴鍋。新手拿到一瓶血清，第一個問題就是問自己，要不要滅活？百度了一下答案，嚓，還是中藥，說啥的都有。還有，別忘了，血清同時含有內毒素、血色素、補體、抗體等其他有害成分，影響細胞生長甚至導致細胞死亡，對某些實驗來說，極為重要。

如此的不穩定，該怎麼在實驗過程中儘可能的解決呢？

（1）土豪和有得選擇的實驗室，請選擇無血清培養基。

（2）不要頻繁更換血清牌子，不同廠家血清來源，生產工藝，包裝運輸等都有很大差異，盡量不要更換牌子。

（3）選定品牌後，對於經過測試過的好用的血清，同一個批次多囤積一些，計算本次實驗的大概用量，然後在多加20%的儲備，放在-20或-80度保存。

（4）細胞實驗建議每個人用自己的培養基，PBS，胰酶等試劑以及用具，保持實驗條件一致性，避免交叉污染，別給自己添堵，也別給別人添堵。

（5）如果實在要更換血清，先將細胞在新的血清里傳兩到三代，適應新的條件後，細胞狀態穩定，再進行後續的實驗。

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