做了十年的重組蛋白表達，來分享一些自己的感受吧

從學校畢業後就進入一家公司做重組蛋白表達工作，猛然間才發現，原來2008已經是十年前的事情了，自己也從原核細胞表達平台調到了HEK293穩定株及瞬時表達平台，期間還在桿狀病毒-昆蟲細胞表達平台、酵母細胞表達平台待過一段時間。可以說這十年時間，我的青春奉獻給了重組蛋白的不同表達平台，所以接下來我就說一說這些平台的故事吧。

原核細胞表達平台是最常用的表達系統，經濟實惠，可以表達一些無糖基化或者經過簡單修飾的重組蛋白，但是有些特殊的表達載體難以與宿主菌相容，使得目的蛋白無法表達，還有就是經常出現包涵體，表達蛋白不可溶，在純化過程中容易造成重組蛋白失活。當然為了克服這些問題，我們組要經常進行表達載體與菌株相容性測試、誘導表達條件優化、復性等試驗，經過這十年的優化，我們積累了大量的經驗，建立了完整的載體與最佳菌株相容庫。我們還建立了2000L的大腸桿菌生產車間，可以實現工業化生產。

CHO穩定株和HEK293瞬時表達平台的出現克服了翻譯後修飾蛋白表達的問題。此平台表達的蛋白具備摺疊和修飾的功能，高度人源化，可以用於結構、功能分析。表達量明顯提高，使得大規模表達更加容易。穩定及瞬時表達平台，從細胞轉染、篩選到分離，整個操作過程在無血清培養條件下完成，可以實現翻譯後特殊修飾，形成多聚體，在多肽內或多肽間形成二硫鍵，或者進行特殊的糖基化。我們現在每天進行小規模的蛋白表達可以近千次，從100ml的細胞篩選到1L的表達條件構建不等。我們建立的高效穩定株、細胞系，可以進行大規模生產，從2L到200L培養體系的穩定運行，cGMP車間的100L到1000L的穩定表達。

桿狀病毒-昆蟲細胞表達平台操作流程簡單、表達水平高，可以表達翻譯後修飾的重組蛋白，可用於表達多種病毒蛋白、激酶蛋白等，尤其擅長進行定位於胞內、核內的重組蛋白表達。我們優化了sf9、sf21昆蟲細胞的培養條件，自主研發了一套培養基，有效的提高重組蛋白表達量。

酵母細胞表達平台以畢赤酵母為表達載體，融合了原核表達與真核表達平台的優點，可以表達糖基化蛋白，表達量高且穩定。此平台可以表達一些在其他平台無法表達的蛋白。

十年的蛋白表達經驗，從原核到真核，從最初的瓶瓶罐罐到現在的不同規格的反應器，可以說我見證了重組蛋白從難表達到規模化製備的過程。

看看我現在用的這些設備怎麼樣？他們可以用於蛋白濃度測定、吸收光譜檢測、N末端序列測定、質譜分析等蛋白性質、功能等分析測定。

大家如果在重組蛋白方面有什麼想法，可以在下方和義翹神州一起討論。

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