實驗員分享微生物日常檢驗過程注意事項

一、培養基的滅菌及使用

（1）每次配置時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，並且未吸潮。

（2）培養基配置時，稱量要準確，包括鹽水的分裝要準確。

（3）一定要保證現配製現滅菌，未滅菌的配好培養基不能長時間放置，更不可隔夜。

（4）滅菌時要保證恆溫、恆壓，同時要保證有效滅菌時間。

（5）滅菌過的培養基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過 3 天。而且要遵循「先入先出」原則，先配製的要先使用。

（6）在使用時，要根據當班次的使用量，用水浴鍋先將培養基溶化為液態，然後及時調低水域溫度（先化好的可從水域取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時間使培養基處於高溫狀態。

（7）做產品微生物檢測時，傾倒培養基溫度在 45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死；也不可過涼，化好的培養基又結塊凝固，不便於觀察結果。

（8）每瓶培養基均要做空白。

（9）盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出現誤差結果。

（10）培養基剩餘過少時，可先將其傾倒成空白用板。

二、 做樣環境的維持

（1）大環境（房間）

1）做樣時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響安全櫃內部環境（最好在有通排風系統的恆溫恆濕無菌間進行操作）。

2）如果在原來的原料微生物檢測室進行做樣，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。

（2）小環境（生物安全櫃）

1）工作前準備

a. 首先紫外燈照射30分鐘

b. 關紫外燈，打開安全櫃的日光燈和風機，用消毒劑對生物安全櫃的內表面進行消毒擦拭

c. 將實驗中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭後放在檯面相應位置上（切記勿阻擋風口！）

d. 等待5min，凈化工作區的空氣污染物

2）操作規範

a. 雙臂垂直緩慢進入前面的開口，在生物安全櫃中等待大約一分鐘，以使安全櫃調整完畢後才可對物品進行處理。

b. 所有操作應在離前窗10cm以外的工作區進行。

c. 廢棄物應丟棄在生物安全櫃內的處理容器中。

3）操作時注意事項

a. 雙避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進出

b. 盡量避免污染的物品進入潔凈區

c. 避免使用明火干擾氣流，可使用微型電加熱器，最好使用一次性接種環。

d. 在生物安全櫃內進行操作時，不能進行文字工作

e. 盡量減少操作者身後的人員活動。

4）工作結束後的要求

a. 將安全櫃繼續運行至少3min來完成「凈化」過程

b. 將櫃內物品移出前，應使用有效的消毒劑擦拭（特別是黴菌）

c. 每天實驗結束後，對生物安全櫃的內壁和檯面進行擦拭

d. 等待5分鐘後，關閉前窗，關燈，關風機，紫外燈照射30分鐘

三、 工器具的潔凈度

（1）玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌。

（2）做樣用剪刀、勺子等物品要做到做樣專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再採用灼燒方式進行滅菌。

（3）接種針（環）採用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針（環）進行冷卻。

四、樣品的採集及檢測

（1）保證採樣器具的無菌性

1）玻璃器皿：採用乾熱滅菌方式進行滅菌，保證恆溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。

2）取樣筐：使用前要用75%酒精進行噴洒消毒。

3）取樣勺：要保證其清潔消毒，清潔後用75%酒精進行擦拭消毒。

4）取樣袋：可先用酒精進行擦拭消毒，再在安全櫃用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。

5）電子稱表面用 75%酒精消毒。

（2）人員操作

1）保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。

2）取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。

3）取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入安全櫃，對其外表面進行紫外燈照射消毒。

4）在要求的做樣區域進行操作。

5）做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。

6）往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

7）樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品從管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

8）鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，會將部分微生物燙死；也不能溫度太低，不能將樣品溶解完全。

9）進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

10）傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中幹掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

11）做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入安全櫃對外表面進行紫外線滅菌。

12）接二步時，要注意先將接種針（環）進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發生，導致無法判斷、確認。

13）做樣完畢，及時放入相應培養箱進行培養，並清理清潔安全櫃。

五、 微生物的培養

（1）在培養過程中，要隨時監控培養箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養。

（2）要按照《微生物檢驗規範》要求及時觀察結果，出現異常，要及時分析原因進行反饋。

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