微生物檢測中樣品檢測相關操作
樣品的採集是微生物檢驗的重要組成部分，用於檢驗的樣品數量和狀況具有重要意義。這對取樣人員和制樣人員提出了很高的專業要求，既要保證樣品的代表性和一致性，又要保證整個微生物檢驗過程在無菌操作的條件下進行。小編整理了部分微生物檢測過程中取樣、樣液製備、稀釋、接種、培養的簡單操作，大家一起學習參考。
一、微生物取樣及樣液製備
1 樣品標識
取樣時，將樣品按不同的污染程度從低污染程度到高污染程度順序排列，
並對出對應的標識，其中按細菌數平皿、大腸菌群平皿、金黃色葡萄球菌平皿的順序，2-3個樣品一摞。如圖
2 樣品採取
（1）固體樣品
① 開啟部位及其周圍用酒精棉進行消毒，再用火焰滅菌的剪刀剪開，如圖
② 在電子稱上放入無菌均質袋（手不要碰及袋口）去皮調整至零，如圖4
③ 用火焰滅菌後的剪刀和鑷子取樣，稱取25g樣品，如圖
④ 加入225ml滅菌磷酸鹽緩衝液（開蓋瓶塞時瓶口部和瓶塞應在火焰通過1-2次，以殺滅從空氣中落入雜菌）後，均質或待均質，如圖
⑤ 擦拭乾凈剪刀鑷子後浸泡於75%酒精容器中並將樣品封口；將袋子摺疊後用拍擊式均質器均質約30秒作為樣液，此時均質袋內要設定為不含空氣（可根據樣品不同情況相應調整均質時間），如圖
（2）液體樣品
①冷凍樣品完全解凍後使用。
②75%酒精棉消毒開啟部位及其周圍，再用火焰滅菌的剪刀開啟，用滅菌吸管取充分混合後樣25ml。
③ 同上 ④ ⑤。
(3) 粉末狀樣品以及半固體樣品
①將樣品混合均一化。
②75%酒精棉消毒開啟部位及其周圍，再用火焰滅菌的剪刀開啟，以無菌匙採取混合後樣10g。
③加入90ml滅菌磷酸鹽緩衝液，開蓋瓶塞時瓶口部和瓶塞應在火焰通過1-2次，以殺滅從空氣中落入雜菌。
④ 同上⑤。
注意
1
從罐頭取樣時，在表面放上小塊酒精棉（倒上少量酒精）點火燃燒後開罐。罐頭起子用酒精棉擦拭火焰滅菌後使用。
2
75%酒精必須保證一周換3次，如果容器內有明顯的污物應立即更換；火焰滅菌的剪刀、鑷子通過火焰4-5s即可
二、樣液稀釋方法
①從均質袋準確吸取樣液1ml，如圖
②沿管壁徐徐接種到含9ml磷酸鹽緩衝液里，蓋上試管塞後充分震蕩混勻為1：100稀釋液。（勿使吸管尖端伸入稀釋液內，以免吸管外部粘附的檢液溶於其內。）
③重複該操作，按需要配製1：1000、1：10000…稀釋液。
④為減少樣品稀釋誤差，在連續遞增稀釋時（原液在前稀釋液在後），每一稀釋液應充分振搖，使其均勻，同時每一稀釋度應更換一支吸管。
⑤不要在稀釋劑中吹洗吸管。
注意
1
樣液稀釋必須加以足夠震搖，確保液體混勻，形成的菌落能以10倍遞增或遞減，符合邏輯性
2
車間產品根據加工工藝或對污染情況的估計選擇合適的稀釋倍。（尤其注意蔥、姜、蒜等無加熱類產品、保存實驗、外調新廠家、樣品開發、原料等樣品）。
三、樣液接種方法：
① 從吸管筒沿筒上壁抽出吸管，在火焰旁吹洗吸耳球同時在吸管尾端插上吸耳球後，從吸管尾端至尖端快速通過火焰，並且排空吸管里殘留的水，如圖
② 吸管插入均質袋樣液內的深度不超過2.5cm處，準確吸取樣品勻液，吸管尖不要碰著袋口。吸入的液體應先高於所要求的刻度, 然後提起吸管使其尖端離開液面並貼在袋內將液體調至所要求的刻度。
1ml、1ml、1m、0.2ml無菌操作分別以2～4s內完全注入已標識清楚的細菌數、大腸菌群、EC以及金黃色葡萄球菌平皿中，接種後迅速震蕩均勻，如圖
③ 如果在接種前，某一樣品液體放置超過3 min，應重新均質；為了驗證稀釋液、培養基、平皿、吸管等器具無菌需做空白對照。
四、傾注倒藥方法
右手持培養基三角瓶（已放50-60℃的水浴中恆溫）置火焰旁邊，用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫，迅速倒人培養基約15ml，加蓋後輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布在培養皿底部，然後平置於桌面上；也可將平皿放在火焰附近的桌面上用左手的拇指和食指打開培養皿，再注入培養基，搖勻，如圖
注意
1
培養基在50-60℃水浴中的保溫時間不要超過4h；從採樣開始到分注培養基操作限於20min以內。
2
塗布的平皿表面需乾燥（乾燥不充分易發生菌落擴散，有冷凝水不利於細菌分離並且會導致細菌繁殖使結果失真；乾燥過分，會導致培養基裂開，不能用；乾燥合適，則樣液吸收完全、快）。
3
玻璃器皿的表面容易被細菌吸附，所以菌液注入平皿後應儘快將平皿內的樣液和瓊脂培養基充分混合，否則細菌不容易分散。混合方法是將平皿傾斜和旋轉使之充分混合，但要注意不要讓培養基從培養皿內溢出，且不要粘附在平皿壁和蓋上。
五、平皿培養
（1） 將平皿倒置放入恆溫培養箱中，平皿間要留有空隙進行空氣流通，使培養物的溫度儘快與培養箱溫度達到一致，按照規定的溫度和時間進行培養並保持一定的濕度，經48h培養的瓊脂培養基的失重不得超過15％，如圖
（2）斜面、高層斜面、液體培養基立在試管架上放入恆溫培養箱中，按所規定的時間溫度進行培養，如圖
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