金黃色葡萄球菌檢驗解決方案

03-27

金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的機會很多。美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次於大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛生難題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒，占整個細菌性食物中毒的33%[1]，加拿大則更多，佔到45%，中國金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時有發生。

一、生物學特性

典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.5-1μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀見圖1，圖2。

大多數菌株產生類胡蘿蔔素，使細胞團呈現出深橙色到淺黃色，色素的產生取決於生長條件，故稱為金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養要求不高，在普通培養基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37℃，最適生長pH 7.4，乾燥環境下可存活數周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。

二、流行病學

（1）季節分布，多見於春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其製品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品。

（2）食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產生了腸毒素，引起食物中毒；熟食製品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他部位的污染。

三、檢測方法

1、樣品製備：

稱取25g樣品至盛有225mL 7.5%氯化鈉肉湯中，固體樣品研磨或置均質器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數檢驗，可按十進位遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。

2、增菌與分離培養：

將上述樣品勻液於36℃±1℃培養18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板 36℃±1℃培養18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養24h～48h。

金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並乾燥。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。

3、鑒定：

(1) 染色鏡檢：

金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列呈葡萄球狀，無芽孢，無莢膜，直徑約為0.5μm～1μm。見圖6

(2) 血漿凝固酶試驗：

取0.5ml兔血漿，放入小試管，再加入BHI培養物0.2mL~0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃培養，每隔半小時觀察一次，連續觀察6小時，出現凝固即將小管傾斜或倒置，內容物不流動，判為陽性，同時做陰陽對照見圖7。