如何測量微生物之菌數？
02-23
食科系微生物學老師提的問答題，不太懂他想讓我回答啥。
就五種辦法：1、電子細胞計數器（不準確，需校正）2、血球計數板（最準確，需染色）3、平板計數法（較準確，需校正）——食科的人愛用
4、分光光度法（不準確，不介入）
5、流式細胞儀（不準確，控流速）之前回答過類似的問題日常接觸的物品上的細菌數量是如何統計的？細菌數量越多就說明越有潛在危害嗎？ - 洪捷的回答基本上也就是之前幾位知友說的那些方法。
蟹妖。可以用分光光度計簡單地測濁度，然後按經驗公式推。不過這顯然只能用於菌濃度十分可觀的東西，比如培養液。也可以像測水樣那樣，先稀釋適當倍數，然後過膜，然後培養計數。
我廠是做益生菌的
先驕傲一下，目前出廠是單位每毫升300億-1200億活菌檢出，專利技術可保證1年內活菌數不低於100億/ml.作為學渣，我只知道想要看到活的必須要染色，測量菌數方法待我向實驗室老師諮詢後填坑先上圖：顯微鏡下的益生菌（嗜酸乳桿菌，植物乳桿菌，乾酪乳桿菌和「保密菌株」）
食品微生物學檢驗 乳酸菌檢驗
本標準規定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lactic acid bacteria）的檢驗方法。
本標準適用於含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的檢驗。2 規範性引用文件
本標準中引用的文件對於本標準的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用於本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用於本標準。
3 術語和定義
3.1 乳酸菌 lactic acid bacteria一類可發酵糖主要產生大量乳酸的細菌的通稱。本標準中乳酸菌主要為乳桿菌屬（Lactobacillus）、
雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）和鏈球菌屬（Streptococcus）。
4 設備和材料
除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備和材料如下：4.1 恆溫培養箱：36 ℃±1 ℃。
4.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 4.3 均質器及無菌均質袋、均質杯或滅菌乳缽。4.4 天平：感量 0.1 g。
4.5 無菌試管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。 4.6 無菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。 4.7 無菌錐形瓶：500 mL、250 mL。5 培養基和試劑
5.1 MRS（Man Rogosa Sharpe）培養基及莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）改良 MRS 培養基：見附錄 A中 A.1。 5.2 MC 培養基（Modified Chalmers 培養基）：見附錄 A 中 A.2。 5.3 0.5 %蔗糖發酵管：見附錄 A 中 A.3。5.4 0.5 %纖維二糖發酵管：見附錄 A 中 A.3。5.5 0.5 %麥芽糖發酵管：見附錄 A 中 A.3。
5.6 0.5 %甘露醇發酵管：見附錄 A 中 A.3。
5.7 0.5 %水楊苷發酵管：見附錄A中A.3。 5.8 0.5 %山梨醇發酵管：見附錄A中A.3。5.9 0.5 %乳糖發酵管：見附錄A中A.3。5.10 七葉苷發酵管：見附錄A中A.4。 5.11 革蘭氏染色液：見附錄A中A.5。 5.12 莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）：化學純。6 檢驗程序
7 操作步驟 7.1 樣品製備 7.1.1 樣品的全部製備過程均應遵循無菌操作程序。7.1.2 冷凍樣品可先使其在 2 ℃～5 ℃條件下解凍，時間不超過 18 h，也可在溫度不超過 45 ℃的條件
解凍，時間不超過 15 min。7.1.3 固體和半固體食品：以無菌操作稱取 25 g 樣品，置於裝有 225 mL 生理鹽水的無菌均質杯內，
於 8000 r/min～10000 r/min 均質 1 min～2 min，製成 1:10 樣品勻液；或置於 225 mL 生理鹽水的無菌均
質袋中，用拍擊式均質器拍打 1 min～2 min 製成 1:10 的樣品勻液。 7.1.4 液體樣品：液體樣品應先將其充分搖勻後以無菌吸管吸取樣品 25 mL 放入裝有 225 mL 生理鹽
水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分振搖，製成 1:10 的樣品勻液。
7.2 步驟
7.2.1 用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 mL，沿管壁緩慢注於裝有 9 mL 生理鹽水的無菌試管中（注意吸管尖端不要觸及稀釋液），振搖試管或換用 1 支無菌吸管反覆吹打使其混合均勻，
製成 1:100 的樣品勻液。 7.2.2 另取 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做 10 倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋
一次，即換用 1 次 1 mL 滅菌吸管或吸頭。 7.2.3 乳酸菌計數
7.2.3.1 乳酸菌總數
根據待檢樣品活菌總數的估計，選擇 2 個～3 個連續的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取 0.1 mL 樣品
勻液分別置於 2 個 MRS 瓊脂平板，使用 L 形棒進行表面塗布。36 ±1 ℃ ℃，厭氧培養 48 h±2 h 後計數平
板上的所有菌落數。從樣品稀釋到平板塗布要求在 15min 內完成。
7.2.3.2 雙歧桿菌計數
根據對待檢樣品雙歧桿菌含量的估計，選擇 2 個～3 個連續的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取 0.1 mL
樣品勻液於莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）改良 MRS 瓊脂平板，使用滅菌 L 形棒進行表面塗布，每個
稀釋度作兩個平板。36 ±1 ℃ ℃，厭氧培養 48 h±2 h 後計數平板上的所有菌落數。從樣品稀釋到平板塗
布要求在 15 min 內完成。
根據待檢樣品嗜熱鏈球菌活菌數的估計，選擇2個～3 個連續的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1 mL
樣品勻液分別置於 2 個 MC 瓊脂平板，使用 L 形棒進行表面塗布。36 ±1 ℃ ℃，需氧培養 48 h±2 h 後計
數。嗜熱鏈球菌在 MC 瓊脂平板上的菌落特徵為：菌落中等偏小，邊緣整齊光滑的紅色菌落，直徑 2 mm±1
mm，菌落背面為粉紅色。從樣品稀釋到平板塗布要求在 15 min 內完成。 7.2.3.4 乳桿菌計數
7.2.3.1 項乳酸菌總數結果減去7.2.3.2 項雙歧桿菌與7.2.3.3 項嗜熱鏈球菌計數結果之和即得乳桿
菌計數。 7.3 菌落計數
可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落
形成單位（colony-forming units，CFU）表示。7.3.1 選取菌落數在 30 CFU～300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低於 30 CFU 的
平板記錄具體菌落數，大於 300 CFU 的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應採用兩個平板的平
均數。 7.3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜採用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋
度的菌落數；若片狀菌落不到平板的一半，而其餘一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板後乘以
2，代表一個平板菌落數。 7.3.3 當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數。
GB 4789.35—2010
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7.4 結果的表述
7.4.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數範圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每 g（mL）中菌落總數結果。 7.4.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數範圍內時，按公式（1）計算：
(1)
式中：
記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。 7.4.4 若所有稀釋度的平板菌落數均小於 30 CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計
算。
7.4.5 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小於 1 乘以最低稀釋倍數計算。
7.4.6 若所有稀釋度的平板菌落數均不在 30 CFU～300 CFU 之間，其中一部分小於 30 CFU 或大於 300CFU 時，則以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。 7.5 菌落數的報告 7.5.1 菌落數小於 100 CFU 時，按「四捨五入」原則修約，以整數報告。7.5.2 菌落數大於或等於 100 CFU 時，第 3 位數字採用「四捨五入」原則修約後，取前 2 位數字，後
面用 0 代替位數；也可用 10 的指數形式來表示，按「四捨五入」原則修約後，採用兩位有效數字。7.5.3 稱重取樣以 CFU/g 為單位報告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報告。
8 結果與報告
根據菌落計數結果出具報告，報告單位以CFU/g（mL）表示。9 乳酸菌的鑒定（可選做）
9.1 純培養挑取 3 個或以上單個菌落，嗜熱鏈球菌接種於 MC 瓊脂平板，乳桿菌屬接種於 MRS 瓊脂平板，置
36 ℃±1 ℃厭氧培養 48 h。 9.2 鑒定 9.2.1 雙歧桿菌的鑒定按 GB/T 4789.34 的規定操作。 9.2.2 塗片鏡檢：乳桿菌屬菌體形態多樣，呈長桿狀、彎曲桿狀或短桿狀。無芽胞，革蘭氏染色陽性。
嗜熱鏈球菌菌體呈球形或球杆狀，直徑為 0.5 μm～2.0 μm，成對或成鏈排列，無芽胞，革蘭氏染色陽性。 9.2.3 乳酸菌菌種主要生化反應見表 1 和表
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