只需一步就可以獲得近天然高活性的重組蛋白

作者：義翹神州 - 知乎

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還在為表達蛋白摺疊、翻譯後修飾的蛋白煩惱嗎？還在為蛋白結構-功能分析難以合成合適的重組蛋白而發愁嗎？還在為重組蛋白的結構與天然蛋白差異大而苦惱嗎？還在為重組蛋白的活性低而鬱悶嗎？其實這些問題能夠一步解決，就是選擇哺乳動物表達系統即可解決。CHO和HEK293細胞穩定株及瞬時表達系統，可以實現低內毒素、高活性蛋白的表達。系統表達的重組蛋白可以翻譯後修飾、蛋白摺疊，結構更接近天然蛋白。

CHO及HEK293細胞穩定株及瞬時表達系統，表達水平高，可以平行開展近千個的細胞株篩選或表達分子靶點篩選實驗，具有高通量高效率的特點。此系統細胞系已失去細胞接觸抑制和錨地依賴特徵，容易實現大規模培養。細胞遺傳性狀穩定，易於標記，分裂周期短，易於控制。在安全性方面，不會合成或分泌致病物質。

CHO穩定株及瞬時表達系統，遺傳背景清楚，代謝穩定。與人的親緣關係較近，外源蛋白修飾準確，可以準確的轉錄後修飾，使表達的糖基化蛋白在分子結構、理化特性和生物學功能方面更接近於天然蛋白分子。CHO細胞系統可以讓重組基因高效擴增和表達，產物胞外分泌，易於純化。CHO細胞可以貼壁生長也可以懸浮培養，而自身分泌的內源蛋白較少，更加有利於外源蛋白的分離純化

HEK293細胞是由人胚腎細胞轉入腺病毒5型DNA改造而來，能夠增強CMV啟動子後的外源基因的轉錄功能，實現高效表達。改造後的HEK293細胞可以作為反式調控子促進含有oriP元件的擴增，使其在細胞中的拷貝數增加，瞬時轉染的表達量提高。HEK293細胞來源於人類，在臨床實驗方面更有優勢，很多人源化治療性重組蛋白表達首選此系統。HEK293瞬時轉染系統表達的蛋白可以實現更複雜的翻譯後修飾和糖基化，人源化程度更高，容易實現大規模生產。

雖然CHO和HEK293細胞穩定株及瞬時表達系統，在重組蛋白表達方面具有很大的優勢，但是存在細胞培養成本高，培養條件難掌握，易污染等不足，在一定程度上影響了其應用的廣泛性。而想要獲得高效表達、翻譯後修飾、人源化程度高的重組蛋白，這一系統卻是首選。因此，很多有這些需求的科研人員會選擇找一個可以提供此類技術服務的廠家來進行重組蛋白表達。那麼要選擇什麼樣的廠家才能既不耽誤科研進度，還可以節約科研經費呢？

首先重組蛋白表達經驗要豐富，比如十年以上的CHO和HEK293細胞穩定株及瞬時表達基礎，近7000個分子靶點的表達經驗，從基因構建到蛋白純化的一站式服務。其次就要考慮重組蛋白表達的周期，比如2-3周完成一個蛋白的表達純化，可以同時開展近千種的小規模平行試驗。還有就是要考慮生產規模，能否實現從100ml的小規模篩選實驗到1L培養條件優化，再到2-200L不同規模的反應器表達規模，甚至是500-1000L大規模的生產製備，因為大規模製備可以保證批次間的穩定性高，蛋白內毒素含量更低。

關於CHO和HEK293細胞穩定株及瞬時表達系統，你還有哪些方面的認識呢？

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