【剖析】：細胞增殖、周期方法

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小夥伴們，咱們做細胞實驗一般首先想到的就是增殖和周期。細胞增殖與周期是評估細胞代謝、生理病理功能的一個非常重要的功能參數，是測定物質毒性、評估藥物安全評價、細胞健康的基本方法。酸菜近期特地對細胞周期及細胞增殖的檢測方法做了些匯總，拿出來給大家分享一下，希望對小夥伴們有幫助。

--by酸菜

　　細胞周期及細胞增殖常見的檢測方法包括：細胞計數法，BrdU滲入法，MTT法，流式細胞儀測定法等。

細胞計數法：

　　體外培養細胞生長、分裂增殖的能力，可以用分裂指數來表示。分裂指數指細胞群體中分裂細胞所佔的百分比。該方法需要對不同時間點的細胞分別固定，然後在光鏡下計數。此法的不足之處在於無法區分增殖細胞與非增殖細胞。但是可應用此基礎繪製細胞生長曲線。

BrdU滲入法：

　　BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養基後，可做為細胞DNA複製的原料，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入複製的DNA雙鏈中，而且這種置換可以穩定存在，並帶到子代細胞中。此法比較常用，用於區分正在增殖的細胞與靜止期細胞。

MTT法：

　　外源性MTT（四唑鹽）可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中，而死細胞無此功能，DMSO（二甲基亞碸）能溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。此法相較於BrdU方法更加直觀，操作簡單。

流式細胞術的出現為細胞周期分析提供了一個嶄新的平台。接下來，酸菜為大家詳細介紹一下流式細胞術測定細胞周期的方法。該方法是基於對細胞內DNA以化學定量方式的染色（染料著色數量直接與細胞內DNA 含量相關）。染料與抗體的聯合使用不僅能夠反映細胞周期與增殖的情況，而且可以區分凋亡的細胞。在實驗數據的呈現上，也顯得技術上的「高大上」。

流式細胞儀測定法：

介紹兩個能夠區分細胞周期的方法

一、BrdU/PI(溴脫氧尿苷/碘化丙啶)法

　　BrdU（DNA前體胸腺嘧啶的類似物）摻入到新合成的進入S期（DNA合成期）細胞DNA中。用於檢測BrdU的抗體只識別DNA單鏈中的BrdU，對於未變性的雙鏈DNA可用PI染色。持續的BrdU的摻入可以用於確定和分析處於DNA合成活躍狀態的細胞，區分於那些處於靜止期的細胞，從而進行細胞增殖比例的分析；另一方面，不同時間點加入BrdU，可以分析細胞周期動力學。

二、Cyclins/PI (細胞周期蛋白/碘化丙啶)法

　　在細胞周期的不同階段對應著不同的細胞周期蛋白。一般上，cyclin D1 在G1期早期，cyclin E 在G1/S轉變過程中達到頂峰，cyclin A在G2/M期出現，cyclin B1在G2/M晚期出現。同上，用PI染色顯示DNA含量。但是，酸菜提醒各位小夥伴們一點，有個別細胞其cyclins的表達特徵並非如此。

酸菜推薦：

1、 想要繪製細胞和比較不同細胞的生長曲線，推薦採用細胞計數法。

2、 只監測細胞增殖活性，可採用Brdu法、MTT法及BrdU/PI法。

3、 區分G1/S期，G2/M期可採用Cyclins/PI法。

4、 細胞周期與凋亡同時檢測可採用TUNEL/PI染色和F-Actin/PI染色。