如何製作高效率的大腸桿菌感受態細胞？

02-06

試過製作大腸桿菌感受態，但是總是效率不高，請問各位有好的方法嗎

《分子克隆》第三版

inoue法。

製備完用標準質粒轉化試一下，不行就整批扔掉。

一般製備好 -80℃ 2個月效率都很高。

瀉藥。作為為實驗室做過四年感受態的孩子來說，我真的是再也不想做了....實驗室的方法不能外傳啊抱歉！！！全式金的T1不錯，實驗室如果不差錢可以自己購買。

買

做了幾年分子實驗，幾乎天天轉化。我們用氯化銣法，效果不比商用的差，比氯化鈣法好很多(我試過用氯化鈣和氯化銣這兩種方法做感受態)。實驗方法搜一下文獻就知道了，搜索引擎是個好東西，包括pubmed，webofsci谷歌學術等，搞科研的必須要學會收集文獻，整理文獻，看文獻。

做好感受態最重要的是低溫與輕柔操作，這兩點做好了一般都沒問題，我的感受態細胞一般交給沒做過實驗的師弟師妹做，我在一旁看著指導，他們都做的挺好的。如果不放心就買商用的吧，也不貴，全式金的和takara就挺好。

當然，如果有電轉儀推薦做電轉法，效率更高，製作感受態的方法更簡單，只要用百分之十的甘油洗三到五次就可以了

有一些冷門菌株可能沒有感受態賣要自己做；或者你們實驗室用的量實在是非常巨大。

大腸桿菌常用的比如DH5alpha、K12這類的，你直接買就行了，自己做又耗時間又效果差。

這個世界講究分工，請向做的好的公司直接買，是最有效率的辦法

整個流程保證低溫低溫低溫就可以了（除了搖菌的時候）

自己做的感受態細胞一般的質粒轉化肯定木有問題。需要做重要的克隆的時候我會用商品化的，保險。

分析克隆實驗指南寫的很清楚，要注意的是製作過程注意不要染菌。製作後檢測一下。還有如果效率低，可以增加使用量~~