擬南芥植物材料RNA（不含DNA污染）提取

擬南芥植物材料RNA（不含DNA污染）提取方法—包括幼苗、葉片、角果和種子等(O?ate-Sánchez and Vicente-Carbajosa, 2008)

1，用於擬南芥幼苗、葉片和花序材料RNA的提取方法：

首先配製提取液Ⅰ、提取液Ⅱ及7.5 M 醋酸銨，按照如下方法配製。

提取液Ⅰ（100 mL）：2% SDS， 68 mM 檸檬酸鈉，132 mM 檸檬酸，1 mM EDTA。

提取液Ⅱ（50 mL）:4 M 氯化鈉，16 mM 檸檬酸鈉，32 mM檸檬酸。

1）取30~50 mg的材料，在液氮中研磨成粉，迅速轉移到離心管中。

2）加入300 μL 提取液Ⅰ，充分振蕩，室溫靜置5 min。

3）加入100 μL 提取液Ⅱ，緩慢顛倒混勻，4℃ 冰箱靜置10 min。

4）加入150 μL 三氯甲烷，充分混勻，4℃，12000 rpm，10 min。

5）小心取上清，加入等體積異丙醇，顛倒混勻，4℃，12000 rpm，7 min。

6）去上清，沉澱用70% 乙醇洗一次，超凈工作台吹7 min， 加入30 μL 含有DNase Ⅰ的DEPC 水溶解沉澱，37℃ 消化1 hr。

7）加入70 μL DEPC 水、50 μL 7.5 M 醋酸銨和400 μL 無水乙醇，混勻，4℃，12000 rpm，20 min。

8）RNA 沉澱用70% 乙醇洗一次，乾燥RNA 並用20~50 μL DEPC 水溶解。

2，用於擬南芥角果和種子材料RNA 的提取方法：

首先是提取buffer、8 M 氯化鋰和3 M 醋酸鈉（pH 5.2）的配製。

提取buffer（100 mL）：0.4 M 氯化鋰，0.2 M Tris，25 mM EDTA，1% SDS，pH 8.0.

1）取50 mg 角果或種子，液氮研磨至粉末狀，轉移到離心管中，加入550 μL 的提取buffer 和550 μL 的三氯甲烷，充分混勻，4℃，12000 rpm，5 min。

2）將上清轉移到新的離心管中，加入500 μL 水飽和酚和200 μL 三氯甲烷，充分混勻，4℃，12000 rpm，5 min。

3）將上清轉移到新的離心管中，加入1/3 體積的8 M 氯化鋰，充分混勻，4℃ 冰箱過夜或-20 ℃靜置1 hr，4℃，12000 rpm，30 min。

4）加入500 μL DEPC 水，7 μL 3 M 醋酸鈉和250 μL 無水乙醇，混勻，4℃，12000 rpm，10 min沉澱多糖。

5）將上清轉移到新的離心管中，加入43 μL 3 M 醋酸鈉和750 μL 無水乙醇，混勻，-20℃ 冰箱放置 1 hr，4℃，12000 rpm，20 min。

6）RNA 沉澱用70% 乙醇洗一次，超凈工作台乾燥7 min，加入含有30 μL DNase Ⅰ的DEPC 水溶解沉澱，37 ℃消化1 hr。

7）加入70 μL DEPC 水、50 μL 7.5 M 醋酸銨和400 μL 無水乙醇，混勻，4℃，12000 rpm，20 min。

8）RNA 沉澱用70% 乙醇洗一次，乾燥RNA 並用20~50 μL DEPC 水溶解。

參考文獻：

O?ate-Sánchez, L., and Vicente-Carbajosa, J. (2008). DNA-free RNA isolation protocols for Arabidopsis thaliana, including seeds and siliques. BMC Research Notes 1, 93.

http://weixin.qq.com/r/KkQmPuLE17_oraZd9xE4 (二維碼自動識別)