「兩對半」解讀之——e抗體數值為何越小越「陽」

在最近的微信諮詢中，爆姐發現了一個現象，對於乙肝「兩對半」的檢測，凡是給出定性結果的，即直接告訴你陽性/弱陽性/陰性，或用+/±/-表示的化驗單（如圖1），大家一般都沒什麼疑問，但對於半定量的化驗單（如圖2），即能給出一個數字，配上s/co或COI為單位時，大家往往存在一種疑惑——為什麼e抗體只有零點幾、甚至零點零幾，還被標上了陽性？是不是標錯了？為什麼e抗體（有時候還有核心抗體）的參考範圍和其他的幾項不一樣？為什麼e抗體越大越陰，越小越陽？

圖1

圖2

在此，針對這類共性的問題，爆姐做一個簡單的解釋。

對於乙肝兩對半的結果，分為定量、半定量和定性三種表示方式。

目前中國絕大多數的醫院檢驗科都不能做到乙肝兩對半全部指標定量，真正能給出定量結果的只有表面抗原HBsAg一項，以IU/ml為單位，極少部分科研機構還能給出e抗原HBeAg的定量，但單位不是國際單位每毫升，而是PEIU/ml，除此之外，你們在化驗單上看到的「數字」如果以s/co或者COI為單位，他們均不是定量的結果。

那這些數字代表什麼？

在回答這個問題之前，我們首先來看絕大多數半定量「兩對半」檢測的實驗基礎——酶聯免疫吸附試驗的原理（其他更先進的方法原理與之大同小異，只是顯色的方法不同而已，都是以抗原-抗體反應為基礎的）。

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）其實很淺顯易懂，我以「雙抗原夾心法」為例做說明：在固相載體（也就是一個板子）表面鋪上一層抗原，這一層東西就緊緊的吸附在這個板子上了，然後再往這個板子上加上樣本，樣本里含有待檢測的抗體，這時就會發生抗原-抗體反應，加上去的目標抗體就能結合到板子上的抗原上，也被緊緊的綁定在了板子上了，至此，我們完成了「免疫」和「吸附」，把我們要檢測的目標鎖定在了固相載體上。我們接下來要做的就是讓被鎖定的目標顯現出來，即「酶聯」，我們再往板子上加上被酶標記的抗原，這時會再次發生抗原-抗體反應，帶有酶標記的抗原會結合到我們的目標抗體上，有多少目標抗體就會結合上多少帶有酶標記的目標抗原，而這些酶能夠催化底物發生氧化還原反應，形成有色物質，所以，目標抗體越多→結合上的帶有酶的抗原越多→酶越多→產生的有色物質越多，這就意味著最後顯色的溶液顏色的深淺與標本中抗體的含量正相關。最後，我們拿著顯色的溶液去測OD值，樣本顯色的OD除以陰性對照的OD所得到的數值就是化驗單里的數字。正是因為它是一個比值，而不是具體的含量，雖然能體現趨勢也只能被稱作「半定量」。

「雙抗體夾心法」的原理與剛才分析的「雙抗原夾心法」一模一樣，只是固相載體上結合的物質的順序是包被抗體→目標抗原→酶標記的抗體而已，我就不加贅述了（見圖3，網圖）。

圖3

乙肝兩對半的前三項，就是用的剛才所述的兩種ELISA方法檢測的，表面抗原和e抗原用的是雙抗體夾心法，表面抗體用的是雙抗原夾心法。

但是，兩對半剩下的兩項，e抗體與核心抗體卻並未用「夾心法」而採用的是「競爭法」，他們兩個都可以採用「競爭抑製法」來檢測，e抗體多數時候採取「中和競爭法」檢測。

我們先看看競爭抑製法（見圖4，網圖），以核心抗體的檢測為例，先在固相載體上鋪上一層核心抗原，然後同時加入待測樣本（含有核心抗體）和有酶標記的核心抗體，此時待測樣本里的核心抗體就會與酶標記的核心抗體競爭性的結合於固相載體上，待測樣本里的核心抗體越多，酶標記的核心抗體結合的越少，加入酶底物顯色時溶液的顏色越淺。因此，顯色的強弱與樣本里核心抗體的含量是成反比的。

圖4

我們再來以e抗體舉例，看看中和競爭法（圖5，網圖）。先在固相載體上鋪一層e抗體包被，然後同時加上待測樣本（含有e抗體）和中和e抗原，此時，樣本里的待測e抗體就會與事先鋪在固相載體上的包被e抗體競爭性結合e抗原，由於待測抗體是遊離的並沒有被固定在板子上，因此與待測抗體結合的中和抗原會被洗脫掉，而與包被抗體結合的e抗原就會留在板子上被隨後加入的帶有酶標記的抗體顯色出來。因此，待測樣本里e抗體越多，被洗脫掉的e抗原越多，和板子上包被的e抗體結合的e抗原越少，最終被帶有酶標記的抗體顯色出來的e抗原越少，溶液的顏色越淺。因此，顯色的強弱與樣本里e抗體的含量也是成反比的。

nn圖5

在這兩種成反比的ELISA里，最終化驗單上的數字代表樣品顯色的OD值比上陰性對照（所有的中和抗原都能顯色，顏色很深）OD值，數字越小，樣品中抗體濃度越大。

至此，各位看官應該也能理解，為什麼有的時候e抗體和核心抗體的陰性參考範圍是大於1，陽性參考範圍是小於1了。

鄙人上一次做ELISA還是當學生時上醫學免疫學的實驗課了，歡迎各位檢驗科、感染科醫師指正。

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另：

評論里有人質疑圖2的核心抗體範圍是正的，的確是這樣，並不是所有的核心抗體都用的競爭法，我舉圖2也只是為了說明e抗體而已。

那麼再從客戶的化驗單里找一張，

這一個體檢機構e抗體和核心抗體用的都是競爭法，陰性範圍是1以上，陽性範圍是1以下。請無視那兩個缺心眼的箭頭方向，這個化驗單的意思是表面抗原、e抗體、核心抗體陽性，DNA 251拷貝/ml

不行，感覺眼睛要被傻X體檢機構弄瞎了，下面貼另一位客戶的正確範例：

這個化驗單的e抗體和核心抗體都用的競爭法，寫了患者看得懂的陰性/陽性結果，箭頭方向正確，寫了半定量數值，還寫了半定量數值的參考範圍，大家至此應該徹底看懂了吧？

從化驗單的細節體現以病人為本的理念，大三甲就是大三甲。