基於Cpf1一次實現多基因編輯的技術

昨天去大神實驗室網頁（Zhang Lab @ MIT）轉的時候發現還是上次那個樣子沒有一點更新，第一反應就是這不科學啊，Yinqing Li的單神經元轉錄組的文章（Div-Seq）在去年就在Science上出來了，然後就PubMed檢索了一下，發現了這篇文章。說起來也是很簡單，Cpf1不同於Cas9之處就是它自己可以根據需要將crRNA切割並形成有效的複合體（圖1）。也就是說理論上只需

將多個crRNA線性排列在一個啟動子之後，就可以實現用一個質粒完成多個基因的編輯了（圖2a）。然後他們就設計了單個crRNA以及不同長度的串聯靶標序列和Cpf1識別序列的組合來檢測其對多基因的編輯效果，結果顯示多個串聯crRNA表達後對每個基因的編輯效率都蠻高（圖2b），隨後在小鼠大腦內實現了三敲之後整篇文章的重點結束。

通過這篇文章咱又學習了一點：Cpf1具有多基因編輯的能力。這和之前咱介紹的借用tRNA處理機制實現多基因編輯的方法（戳此查看）相比而言，需要的序列更短了，對於全基因組範圍內高通量基因編輯的實踐意義也是非同小可。為啥？因為需要的crRNA長度更短唄，更容易合成和操作，不同crRNA之間發生重組的概率也得以降低。

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參考文獻：Multiplex gene editing by CRISPR–Cpf1 using a single crRNA array

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