選擇正確的大腸桿菌細胞

市面上的感受態細胞種類相當多，說有百餘種絕對不是誇張，到底選哪一個是由你要進行的實驗來決定的，不同基因型的大腸菌株自然是可以滿足不同的實驗目的。小編在本文簡單總結常用的那幾種基因型（Genotype）的大腸桿菌細胞，以及他們能滿足的實驗目的。至於在具體實驗中應該選擇哪一種基因型的細胞，小編覺得最好的方法是和導師/師兄/師姐討論，問問他們曾經用的是什麼細胞以及用的效果怎麼樣，再結合自己的實驗目的選出最合適的細胞種類。

E.coli 的歷史

1885年，Dr. Theodor Escherich發現了一種長條狀的細菌，從那時起這種gram-negative 細菌就被命名為Escherichia coli。 E.coli主要出現在動物腸道中，自然界中也有許多致病性極強的E.coli。大部分市面上可以買到的大腸桿菌感受態細胞來自兩種單獨發現的E.coli：K-12 Strain和B Strain。K-12是在1920年從一個病人身上分離出來的，後來經改造成為大腸細胞系MG1655，也就是現在市面上DH5alpha 和 DH10b的前身（a.k.a. TOP10）；B的發現歷史就比較曲折了，直到1942年才有正式E.coli B strain這個命名，所以原代細胞是啥時候發現的，小編也不知道，只知道現在市面上常見的BL21就是BStrain的後代細胞。

常見的感受態細胞基因型

現在市面上的大腸細胞系都是為了特定的目的而構建的，比如：高速生長/分裂，高通量克隆，普通克隆等等等等。有許多變異在各種細胞系中都有出現，特別是一些能夠提高質粒產量和DNA質量的變異，更是被廣泛採用。

保證外源質粒的完整性endA

描述：對非特異性限制酶（Non-specific Endonuclease I）進行基因敲除（Knock-out），以減少限制酶的活性，進而降低對外源DNA的剪切。

適用方向：提高外源質粒的數量和質量。

描述：hsdR位點變異，減少細胞對未甲基化的位點的剪切。

適用方向：提高某些PCR產物的轉化效率。

dam/dcm

描述：消除甲基化對腺嘌呤（Adenine）和胞嘧啶（Cytosine）。

適用方向：幫助某些外源質粒複製，比如攜帶易受甲基化影響的酶切位點的外源質粒。

描述：阻止細胞識別從其他組織來的甲基化序列為異物。

適用方向：基因組DNA或者甲基化cDNA的克隆。

描述：降低DNA重組（recombination）的概率。

方向：提高質粒在細胞內的穩定性。

描述：Exonuclease V的變異，使DNA重組的概率降低。

適用方向：提高質粒在細胞內的穩定性。

描述：去除某些調控基因，使得用於脫氧核糖生成的基因得到大量表達。

適用方向：使得超長質粒得以完整複製，提高轉化效率。

hee

描述：hee=high electroporation efficiency，在電穿孔的過程中，改造過的細胞表現出更強的存活率。

適用方向：更多細胞活下來，更高的轉化效率。

描述：hte=high transformation efficiency。

適用方向：調高轉化效率。

滿足不同的蛋白表達機制laclq

描述：變異的Lacl基因，導致lac repressor的大量表達，因此更嚴格地調控lac promoter。

適用方向：嚴格調控lac promoter控制的蛋白表達。

描述：T7 RNA 聚合酶的基因被重組到大腸桿菌細胞的基因組裡，用於T7 promoter調控的蛋白表達。

適用方向：T7 promoter蛋白表達系統。

描述：攜帶T7 lysozyme（溶菌酶），用於摧毀T7 RNA polymerase。

適用方向：調控T7 promoter蛋白表達系統。

描述：ATPase-dependent protease （蛋白酶）基因的變異，導致蛋白水解能力降低。

適用方向：減少重組蛋白的水解，提高表達產量。

描述：Outer membrane protease 基因變異，因此減少外膜蛋白酶的表達量。

適用方向：減少重組蛋白的水解，提高表達產量。

描述：dnaJ 基因失活。

適用方向：提高某些外援蛋白正確摺疊（folding）。

描述：Glutathione reductase基因變異，提高生成二硫鍵的能力。

適用方向：提高蛋白正確摺疊的概率。

以上只是眾多改造細胞基因型中的一小部分，還有很多不常見的變異菌株，可適用於更加特殊的實驗目的，在這裡小編就不多說了。還是那句話，在你的實驗中具體使用哪種菌株，和用過的有經驗的人討論討論，一般來說就能找到自己能用的細胞種類。

本文作者：@簏岩

原文鏈接：選擇正確的大腸桿菌細胞 | BioEngX