為什麼PCR實驗中要用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA,而不用蒸餾水?
01-23
dna在蒸餾水中的溶解讀度比在2mol/L的氯化鈉溶液中小很多嗎?如果不是的話,用蒸餾水不是更便宜嗎?(雖然氯化鈉也不貴)如果是的話,那除了可以溶解更多dna外,還有沒有別的不用蒸餾水的原因?我同學說用氯化鈉可以去除溶於氯化鈉和不溶於它的雜質,可我覺得用蒸餾水也同樣可以去除溶於和不溶於蒸餾水的雜質,不也去除了全部雜質嗎?難道氯化鈉可以因為鹽析或其他原理更完全地除去某些雜質?…………求大神解答qaq
謝邀
其實,你們搞錯了DNA緩衝液(buffer)的作用。溶解DNA只是最基本的一種作用,DNA可以溶解於很多溶液中,包括那些有機溶劑。
但是,之所以選擇用緩衝液來保存而不是水,主要是防止DNA的降解。DNA是帶電的高分子(否則你也無法跑電泳了),所以,對於帶電的物質,維持電荷穩定才是最關鍵的,否則就容易降解。這就是為什麼我們會選擇緩衝液來溶解DNA,因為緩衝液里有大量的電荷,且可以維持一個ph值較為穩定的範圍(ph和電的關係不需要解釋吧?)所以,結合以上的內容,你應該知道,保存DNA,最關鍵的因素是
1,ph穩定(所以必須用緩衝液)2,沒有DNA酶符合以上條件的,且常用的,就是大名鼎鼎的TRIS-HCL緩衝液,成分是Tris(C4H11NO3),HCL.調整ph一般用的是NaOH和HCL。
你說的NaCl,就是上述緩衝液的一種成分(HCL+NaOH=NaCL+H2O)
當然,你要是短時間使用,且不需要保存的話,直接用水也沒任何問題。
最後,附上緩衝液的定義
當往某些溶液中加入一定量的酸和鹼時,有阻礙溶液pH變化的作用,稱為緩衝作用,這樣的溶液叫做緩衝溶液。英文名是buffer。這個名字,我覺得是生物試劑里最有趣的一個。buffer是一個很有用的東西,幾乎所有試驗都用得到。因為實驗的敏感性,如果不緩衝,你可能提不到東西或者提到一堆碎片看了題主上面的評論,題主應該是想問DNA extraction?
在DNA extraction過程中,sugar phosphate backbone是帶有polarity的,polarity導致DNA溶於水(due to interaction between water molecules and sugar phosphate backbone)
鈉離子會和sugar phosphate backbone形成ionic bond,中和dna的polarity,這樣dna就會比較穩定不易溶於水,此時加入酒精使dna與鈉離子之間的bonding更緊密,當DNA與鈉離子緊密bond在一起時會從水中析出,dna precipitatation完成。高中生物狗,如果答得不對還請指證,先鞠一躬!推薦閱讀:
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