CRISPR/Cas9 在研究基因功能中的應用是怎樣的？

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1. 更徹底的（但不是更方便的）單個基因的knockout

相比shRNA、siRNA敲除更徹底（很多時候shRNA敲除效果不好，4、5個shRNA都不work，如果載體選擇不好的話敲除不穩定），Crispr的話只要不是lethal的基因都能敲乾淨。相比TALEN之類的話更方便。但CRISPR需要挑細胞單克隆，慢慢長起來之後再一個一個colony看基因型，耗時長工作量大，不像shRNA一樣包病毒感染直接殺就好了。這個具體要看你的基因、細胞系、實驗目的之類的了。

2. 更方便的高通量文庫敲除，基因篩選

雖然在敲單基因的時候麻煩，但如果是做高通量篩選就方便很多了。所有細胞轉上Cas9，再把文庫里的所有gRNA一起轉進去，篩表型做個deep sequencing找找是哪個gRNA就好了，比shRNA篩選簡單多了。（參考文章：Phil Sharp和Feng Zhang合作的Genome-wide CRISPR Screen in a Mouse Model of Tumor Growth and Metastasis.）

3. 更好的動物模型建造

CRISPR可以更方便的造轉基因鼠（特別是在癌症領域），敲進敲除器官conitional之類的都能實現，比傳統方法簡便效果好（參考文章：Tyler Jacks組的CRISPR-mediated direct mutation of cancer genes in the mouse liver）

4. 其他新應用

比如更方便的實現chromosomal rearrangement（Sloan Kettering一個義大利PI做的，有興趣可以搜一下），gene fusion之類的。

關係Crispr的新動向、新應用的話，建議看一下幾個元老(Feng Zhang，Jennifer Doudna，George Church)主頁的publication。他們是crispr領域的領跑者：

Zhang Lab @ MIT

The Doudna Lab

http://arep.med.harvard.edu/gmc_pub.html

1.降低經濟成本

2.提高敲除效率

3.設計使用簡單

基於crispr-cas9的高通量篩選使基因功能解析進入高通量時代。

下面有一張圖，是它在基因功能研究中的代表應用案例。以及2014年該技術建立以來所取得的代表性成果。

你好，你可以關注Medical Research這個微信公眾號，上面還是有蠻多新的好文章的，以下幾篇文章對於你了解CRISPR/CAS技術及其應用會有一定幫助。

Science：解析CRISPR/Cas的分子機制

中科院用CRISPR技術治癒小鼠白內障

【倫理】全球首例使用CRISPR/Cas9技術修改人類胚胎基因引爭議

CRISPR-Cas助力大規模基因組研究