瓊脂糖凝膠電泳跑的DNA為什麼會拖尾？

01-12

看百度里的答案里提到
PCR產物自身原因：往往由於酶量過多或酶的質量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，退火溫度過低，循環次數過多，而造成PCR的非特異性產物過多。
但我有疑問是， 1、為何dNTP濃度過高會造成非特異性產物，為何會拖尾 2、為何循環次數多會導致特異性擴增 3、高電壓為何會導致跑出的條帶不夠好看
補充：我的意思就是在問，為何會非特異擴增呢？原理是什麼呢？就是在這種情況下造成的非特異性特徵是如何產生的呢？我非常好奇。

在PCR擴增的時候，dntp的濃度是會影響特異性的。（例如在做易錯PCR時，一種方法就是改變dntp的濃度，具體原理好像是和分子動力學有關係）

另外如果跑條帶的時候出現彗星狀尾巴，還有可能是樣品被酶切了。。（跑RNA的時候尤其容易出現這種情況）

針對問題：

1.已經回答過啦，就不贅述了。

2.是因為PCR次數太多後，引物的特異性結合率會下降，非特異產物就會變多。

3.是因為高壓電會損害瓊脂糖凝膠的孔徑大小，因為跑條帶是為了良好的分開不同分子量的DNA（為了分開不同大小的DNA，使用瓊脂糖的的濃度是不一樣），電壓一高，瓊脂糖分子形成的孔徑被破壞，自然跑的膠就不好看啦。而且電壓過高，甚至會使瓊脂糖凝膠融化，效果自然不會好。

1,2都是非特異性擴增啊！非特異性擴增會產生很多小的片段，所以就拖尾啦

3高電壓導致高電流，高電流使膠融化，就不好看了

樣品溶解不好。

可以參考 PCR問題總結和提高PCR擴增特異性的方法，有不少內容，可以看看

我覺得是電壓高了

酶過量，dNTP過量，鎂離子濃度不適，都會引起錯配，錯配就是非特異性產物增多。這個道理就好像是人如果營養過勝，身體也會出問題一樣。無論是什麼適量最好，少或多都不好