瓊脂糖電泳 DNA拖尾，marker 也跑糊了？

01-12

瓊脂糖電泳 DNA拖尾，marker 也跑糊了從左到右為10000marker (takara) ,上樣5ul片段 ,上樣5ul載體？

典型膠沒凝好，和/或拔梳子的時候把膠孔弄爛，和/或膠孔有殘膠。

話說你有戴防護至少是紫外防護眼鏡嗎？

瓊脂糖沒有完全溶解就倒膠了，或者膠沒有完全凝固就上樣開始跑了，所以膠凝結不均勻，條帶當然不會很好看。看你的條帶形狀，感覺沒有完全溶解的可能性更大。

另外你這個拖尾有點厲害，是電壓加太高了嗎？

你膠也沒有放正，唉。。。

融膠的時候一定要反覆確認瓊脂糖有沒有全部溶解

然後溫度控制到合適的時候再加染料

凝膠的時間要足夠確定膠完全凝固再豎直拔起梳子

跑膠的時候如果想要膠好看就電壓調低點慢慢來，如果只是要回收，快點可以省時間

題主現在的膠做回收是完全沒問題的，不過想要好看的膠還是需要細緻一點慢慢來

換換電泳液，最好用新配置的。

膠槽、梳子等洗乾淨些。

瓊脂膠要完全融化後再到膠，完全凝固後再拔梳子。

都是細節操作的問題，DNA片段、載體、Marker沒有問題的。

三個問題：第一，載體切了對吧？切了是線性，不切的話不是一條帶；第二，為什麼不做對照？有對照才好說明問題啊；第三，這圖就是暗了點，你手提燈看的吧，你用成像系統看啊？不一定非得跑的整整齊齊啊。

最後你用來幹嘛？是回收啊，還是單純看看啊。

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同意一樓，覺得還是膠沒凝好。ps：做分子生物實驗不要玩電話，EB有毒的吧

管他呢，再跑一次唄

最近遇到類似情況。

電壓120V，太大會跑不準。

觀察marker要是跑不勻或位置不對或糊成一片，先重新配膠試試，如果沒改善，倒掉電泳槽的全部電泳液，重新配，再跑一次。我當時的問題是，片段化pcr後位置正常，純化後小片段沒了。本來要重做，還好組會和老闆溝通換了膠和電泳液。

總結幾點要注意：

膠要完全融;

電壓要穩，別為了快隨便加大;

60度左右溫度加dye，不能剛融好膠就加進去。加好dye立刻混勻;

如果電泳液是TAE差不多跑個三四次就該換了，TBE可以久一點;

如果成體系成批量出錯，不要過分懷疑自己的實驗手法，最好不要丟掉重做，先檢查上述簡單問題，以免無端浪費DNA還是找不出真正原因。

兩種可能

1：膠沒融好

可以加熱至冒泡，然後取出搖勻。再加熱搖勻，反覆兩三次。直到充分溶解，溶液變透明。

2：電壓太大。

試著調低電壓，調低電流，加長時間。

膠沒融好就倒板了，下次多用微波爐加熱融幾次，新手幾乎都會做出一次這樣的膠

可能沒加TAE

那又怎樣，是目的條帶不就可以了？

瓊脂糖電泳 DNA拖尾，marker 也跑糊了 ？