物質測濃度時吸光度所對應的波長是唯一的嗎？

01-11

我最近剛開始做實驗，對吸光度不太了解我想知道：
1，一個物質要測吸光度所對應的波長是唯一的嗎？為什麼學長說必須要調到他們說的固有波長（如550nm）才可以測?如果不調到這個波長測出來的吸光度還可以用來推測濃度嗎？
2，如果任何波長都可以，那為什麼之前要費力的去找出波長為550nm呢？

我剛開始，不太懂，希望知乎大神能講得詳細一點，多謝

其實知乎上我很少很少遇到恰好是我的專業知識能回答的問題，但是難得遇到了一個呢，說實話我又不太想回答，因為這個問題太具體了，認真回答固然會對題主很有幫助，但對其他大多數人一點用處也沒有。而作為回答這題的我來說，自然也得不到多少贊——對不起，這樣看起來我是很功利，可是誰不是呢，答題是需要花時間和精力的，如果沒有獎勵機制的反饋會有多少人還願意去寫高質量的答案？

其實我很想推薦題主去小木蟲上問這類專業問題。但說實話我自己都覺得小木蟲更不行。我自己也到小木蟲上問過一些實驗上的問題，並誠心地放上了QQ希望能與其他做那個實驗的人交流，但基本得不到自己想要的解決答案，反而有很多同樣遇到問題的人來請教我，我自己一點好處也沒有，還要花時間去教別人，而且我自己的理解也很有限。

題主很誠懇，具體描述了自己的問題希望得到解答，正如我當初在小木蟲上提問的時候一樣，我可以想像題主希望得到答案的心情，但我忍不住告訴題主：專業上的問題想要得到解決，最好的辦法還是自己查閱資料/求助學長老師來尋找答案。儘管我認真地回答了你的問題，只是你這次運氣好罷了，不代表今後你都能通過這樣的途徑找到答案。

=====接=下=來=是=對=問=題=的=回=答=====

要通過某波長的吸光度來測定在某種溶劑中的某物質濃度，有兩個必要條件：1、該物質在某波長有吸光度；2、該物質在該波長的吸光度（在一定濃度範圍內）有濃度依賴性。

這裡我用我自己通過吸光度測過的某物質濃度作為例子來說明：

該有機物質A可溶解在乙醇中，暫時沒有別的方法定量檢測這種物質，所以我想到了用吸光度來測定其濃度。我用的是酶標儀，應該也可以使用紫外分光光度計。

首先你要知道物質A都在哪些波長有吸光度，也就是你應該先對物質A的乙醇溶液掃個全波長的紫外光譜圖：

這是200mg/ml A的乙醇溶液的光譜圖，出峰在200-300nm之間。（第一個必要條件）（掃峰的精度可以較低，如每10nm測一個點）

接下來我配置了不同濃度的A的乙醇溶液，提高精度（如每2nm一個點）掃一下200-300nm之間的峰：

濃度較高時出峰位置會紅移，並且OD值過高時也不呈線性。降低濃度繼續測：

10mg/ml以內時紅移依然存在，但1mg/ml以內時OD maximun值基本在同一波長（204nm），而且看起來線性比較好，於是我選取這個範圍的濃度-OD值來作標準曲線：

線性良好，於是我就可以用這個標準曲線去測定未知濃度的A溶液在204nm的OD值，從而計算其濃度了。（前提是該未知濃度在1mg/ml以內，如果高於此濃度要稀釋，如果過高就不適合用這個方法測定了，誤差過大。）

這就是用吸光度測定物質濃度的過程和原理。所以回答你的問題：

如果不是物質的出峰位置，比如我這裡的A物質，它再200-300nm之間出峰（有吸光度），你如果測500nm，濃度再高測出來也是0；你如果測230nm，線性不一定好。

======回=答=完=畢======

回答完以後我意識到，這類問題就算提問和描述寫得再認真，也還是與伸手黨無異。

我認為知乎存在的意義在於交流和討論，而不是提問和標準答案。

引以為戒，今後不再回答或提問此類問題。

實驗沒事就要測藥物紫外吸收的路過…
首先回答問題，確實用別的波長也可以測吸光度，但總有那麼幾個特定波長最好，無論是吸光度大小還是其選擇性都足夠理想。

下面是原理部分：
吸光度是由於物質中的共軛結構，雙鍵等對於紫外波長的能量因為分子振動能夠吸收，使得紫外光通過樣品溶液後會發生固定比例的吸收，於是就有了透光率。因為透光率應用起來，和樣品溶液濃度不是線性關係，不便使用。對透光率去對數之後就得到了吸光度，和樣品溶液成正比關係，可以使用朗博比爾定律求出待測物濃度。

於是關鍵就來了，樣品在紫外波長都有吸收，但是有的大有的小，為了提高靈敏度我們選擇吸收度最大的幾個波長。另外為了與雜質還有溶劑的吸收區分開來（一般雜質還有溶劑的吸收在短波區就會結束了），我們會選擇最大吸收波長，比如254nm，280nm都有吸收，但可能254nm雜質也有吸收，於是選擇280nm作為檢驗波長。

吸光度雖然在朗博比爾定律中和濃度有線性關係，但範圍不大，一般吸光度在0.6~1.0的線性比較好，這也影響了波長的選擇，如果一個波長雖然有吸收峰，但如果太小也是不會選用的。實際應用中主要通過選擇樣品溶液濃度來矯正吸光度。

最後再附送一個，透光率與波長作圖本來是一個多凹峰的曲線，為了使用方便與美觀，我們看到的都是做了鏡像對稱的正向吸收峰。

嗯，就是這樣。

總的來說，雖然一個物質可能從254nm到500nm都有紫外吸收，但只有幾個波長有吸收峰，剔除掉雜質和溶劑吸收峰的干擾，就剩下一兩個最理想的波長用於測定了。

請問紫外可見吸收光譜峰值是直線Tu1810D怎麼情況？

之前的幾位從專業的角度回答了，我想從另一個角度提個醒，樓主可以去了解一下方法學驗證。在方法學驗證里你會有很多類似的疑問得到解答，因為很多試驗很多運算啊什麼的都是有理有據的而且專業跨度也不小統計學啦什麼的都有涉獵

那個是最大吸收波長，當然其他有些地方也有波長，但是不足以區分物質與其他物質之間得區別

一般選擇吸光度較大的波長

這個實驗剛剛做過，波長不是固定的，吸光度會在某一值達到最大，所以一般將此值確定下來。具體圖像類似於倒U型，在最大值左右都可以