gRNA中連續的 T（RNA Pol III terminator）到底會不會影響CRISPR效率？

根據 protocol 上面說 TTT 是 RNA Pol III terminator 信號會影響gRNA效率，可是我們平時常用的gRNA構建載體上的gRNA骨架上也有連續的 TTTT，請問這到底應該怎麼算呢？

最近在幫忙檢查編輯失敗的gRNA設計，已經碰到3次設計裡帶4個T的情況了。我自己設計的話是會避免這種情況，但是對於別人的設計我應該給他指出並要求他們重新設計嗎？

由於gRNA的設計，目前還處於玄學狀態，所以那些雷區，不管是真的還假的，都要盡量避免。在gRNA中間出現連續T，會導致gRNA轉錄提前中止，所以到時候出來的gRNA就不完全。從理論上推導的話，這個說法完全成立。