農桿菌轉化法中,Ti質粒中的T-DNA是如何插入目標染色體的DNA中的?
如題,請從微觀層面詳細描述,謝謝!
農桿菌基本上是每個研究植物的人必備的工具,但對它作用機理深入了解得清楚的人並不是特別多。這是一個非常有意思的問題,也有相當多的研究,總結的話,推薦The Plant Cell雜誌出版的教學參考資料,裡面有一章節專門介紹農桿菌,參見:http://www.plantcell.org/site/teachingtools/TTPB23.xhtml
這裡把涉及問題的內容搬運過來。這類生物學過程,一圖勝千言,大家看PPT的截圖。農桿菌整合到基因組上。這個過程是隨機的,哪裡有斷裂就整合到哪裡,不能特異性地選擇目標位置。
對於上述整合的模型,最新的研究給出了更多的證據支持,總結如圖:
(T-DNA與基因組DNA的整合主要通過NHEJ和MMEJ途徑,通過精確修復機制(包括同源重組和直接連接)的比例非常低。引自Kleinboelting et al., 2015, Molecular Plant, The Structural Features of Thousands of T-DNA Insertion Sites Are Consistent with a Double-Strand Break Repair-Based Insertion Mechanism)
以上是農桿菌Ti質粒工作的機制。現在還在繼續研究。利用農桿菌的這些特點,可以改造成可以利用的工具。主要是將Ti質粒上的T-DNA分離出來改造成二元載體,然後將自己感興趣的基因片段放在二元載體上。卸妖。對不起,我是醫學院的,只了解人類的
不請自來
基於Ti質粒的轉基因……推薦看一些資料 具體問題太複雜 寫的太多 最近在寫論文 先佔個坑
幾個關鍵詞
1.根癌農桿菌 基於這種G+的細菌是負責對細胞進行侵染的操作者 菌裡面的一系列基因是轉基因過程中必須的參與者 各種酶啊有木有2.Ti質粒(以pCambia系列為例)以Left和Right兩個為邊界 一邊是原核部分 包括原核生物中 質粒存在的所有元件 比如 ori啊 抗生素標記之類的 另一邊是真核部分 包括類似CaMV35S promoter之類的東西 使得轉入基因能夠表達 多語言掌握的人 可以同時給說微生物語言和植物語言的進行溝通(此處比喻不恰當)3.誘導劑 如 乙醯丁香酮 一種糖類衍生物的類似物 農桿菌天然宿主多為雙子葉植物 其根系等組織在破損之後會釋放一系列糖類等衍生物 這些衍生物 一方面可以作為信號分子 富集農桿菌(讓農桿菌知道這貨很好吃) 另一方面 可以誘導農桿菌內與轉基因相關的基因轉錄表達(準備好各種剪刀膠水啥的)……有興趣的話 去cnki(其實更好的去google)查查 很多的
不要用百度!
不要用百度!不要用百度!
先寫到這 晚飯時間結束 寫論文去了……瀉藥,正如我的聲明,我不是做轉基因的。
最後一段,抱歉沒法詳細解釋,因為不可能解釋清楚,如果你感興趣,請閱讀基因X 311-318頁
買個試劑盒,我送你說明書
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