將基因轉入E.coli最多可實現多少個酶的同時轉入並表達?有無上限?

已有的工作能達到怎樣的水平?


腦補自然是沒有上限的,就算是自然人我也給你表達出來口牙!

在不了解提問者的前提下,我就腦補你是高中生物水平好了

一般來講,為了方便起見,E.coli里轉酶進去是轉含有酶基因的質粒(環狀DNA),不會整合到它基因組上去

那麼轉質粒進去,為了選擇出陽性菌株(含有質粒的菌株),質粒上會附帶有基因標記,比如盤尼西林抗性基因,相對應的培養基上會含盤尼西林

你要轉多個質粒,就會對應多種抗生素來篩選陽性,隨著系統複雜性的增長,實驗成功率也會急劇下降

或者轉一個大質粒,上面含多個酶基因+一個抗性標記,且不論你如何架構這個大號質粒,轉化效率可想而知,質粒的不穩定性和發生不需要的同源重組的幾率也會上升

總而言之,我無法給出極端條件測試下的具體數據,以一般論而言,一個E.coli里會含1-3個不同質粒


謝邀。

由於專業問題我就簡寫+引用了。

質粒不能共存的主要原因是有相同的轉錄起始位點,就是質粒不相容性http://old.biovip.com/content/20050703/22591.htm,所以要多個質粒共存至少它們起始位點要不一樣。但是07年發表的一篇文章證明也不是太「不相容」http://peds.oxfordjournals.org/content/20/7/309.full。根據他們文章,至少3個是沒有問題的。


先來佔個坑 慢慢答
樓主說的倒入多少基因,應該指的是插入到染色體上,因為如果是用質粒的話會遇到不兼容的問題。我們先來說說為什麼質粒不兼容

為什麼會不兼容
一般認為,兩種質粒攜帶的ori序列所屬同一類型的話,他們會使用相同的細胞複製機制,那麼,對細胞內部有限的複製誘導蛋白的爭搶可能導致兩種質粒不兼容的原因。比如說,質粒A天生(序列本質上來講)就比質粒B要容易複製,或者序列要短,亦或者產生更少量的有害蛋白,那麼質粒A就很容易搶奪到更多的資源用於複製,漸漸地在數量上超過了質粒B,在一代代子代細胞的傳遞過程中,漸漸地質粒B也就慢慢被排擠除了細胞,這樣質粒A和質粒B就是不兼容的。所以一般結論就是,擁有相同ori的質粒是互不兼容的,而擁有不同ori的質粒有很大可能是兼容的。
所以在進行雙質粒轉化之前,要查好所用質粒是不是分別擁有不同的ori (常見質粒系和所對應的ori如下表所示:

今天先寫到這啊


題主問多少個同時表達,不是能轉多少質粒~
轉Ecoli自己的基因,不要overexpression,那答案就是,你可以轉chromosome,可以轉質粒,ecoli 有多少種,你能轉多少種且都能表達了~


這要問大腸桿菌「兄弟,你抗得住多少?」


卡卡卡奧卡卡


理論是很多種,實際上就幾種,涉及的方面太多,大腸桿菌自己也受不了


根據實踐經驗,抗Amp,加mir表達加一個熒光,基本是沒有問題的,所以至少應該是三個


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