質粒或者膠回收試劑盒最後一步洗脫時用的是試劑盒自帶的TE buffer還是去離子水？

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質粒提取或者膠回收的試劑盒裡面都有自帶的TE buffer用來最後一步洗脫質粒或者基因。大家都是用TE buffer還是用加熱的去離子水洗脫的？哪個洗脫效率更高？TE buffer 裡面的離子會不會對接下來的PCR或者酶切造成影響？

TE,理由如下：
1、去離子水容易吸收空氣中二氧化碳，測定核酸濃度時候非常不穩定。
2、TE為鹼性，對溶解的核酸是一種保護。反覆凍融的情況下，DNA在去離子水中降解很快。
3、後續的酶切實驗，使用的酶一般都是過量的。迄今為止我還沒有碰到酶切不成功的情況。、
4、至於測序，可能有影響。據我在華大工作的師弟說，現在為了省成本，該用的試劑不給你用足，這才是我們要關心的吧。我們提交的質粒測序基本上也能測成功。
5、在50-60度加熱後的TE洗脫效果比較好。
6、其實TE裡面主要兩個東西，Tris調pH，EDTA螯合離子，防止核酸酶。無論是酶切還是PCR，可以說你這些東西都被嚴重稀釋了。而且酶切和PCR體系裡面也有離子，在過量的條件下，我覺得影響是很小的。
7、除非你一開始就分裝，否則去離子水的核酸降解速度讓你覺得，一開始的測濃度真的就沒有什麼意義。

我們一直用雙蒸水洗脫。為提高得率可加65度的水並保持65度一分鐘(Axygen kits)。離子對接下來的P，切，測序都有影響。待過四個組，不管大抽（qiagen）小抽還是回收（小和回axygen）就沒用過TE。

保險起見，還是用去離子水的，理論上TE對後續的PCR或者酶切會有影響，尤其是測序
但是也有相當一部分人用TE溶解DNA，然後PCR也能有結果
反正我一直用的去離子水洗兩次，也沒加熱，因為得率都很高，另外有些KIT洗脫用去離子水的話要把pH調到7.5-8.0，認真讀說明書

用去離子水多些