雙向電泳在蛋白質組學中的應用?


作業要自己寫


主要是微生物上多一些,參考乳酸菌脅迫應答的蛋白組學的文章


雙向電泳其實就只是在一維的SDS-PAGE上面加了個等電點分離,方法比較簡單。一個樣品在一塊膠上分離,多個樣品由多塊膠分離,經過二維分離以後,蛋白質會分離成點狀分布在整塊膠,一個點代表一個或多個蛋白質,最後通過比對對塊膠樣相同的位置蛋白的丰度來發現樣品中丰度不同的蛋白,再把蛋白對應的膠點樣品切下,經過質譜鑒定蛋白,由此來鑒定多個樣品中蛋白表達的不同。另外,此方法還可以鑒定不同樣品中蛋白質的修飾是否發生變化,因為蛋白質的修飾會改變蛋白質等電點,因此蛋白質會出現一定的偏離。具體修飾可由通過質譜檢測知道。


雙向電泳在蛋白組學中的應用是很廣的,但其本身也是有局限性的:
1. 雖說IPG技術提高了雙向電泳的重複性,但是電泳條件、樣品的獲得和分離過程等因素,會影響重複性。
2. 雙向電泳時大分子蛋白質,特別是大於100kDa蛋白質的丟失。
3. 雙向電泳仍不能實現自動化。

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1.雙向電泳在蛋白質組學研究中曾經佔有很大的地位,但現在基於非凝膠的LC/MS技術能獲得更多的信息。
2.基於凝膠的雙向電泳技術所用儀器(等電聚焦儀、二向電泳儀等)和耗材主要有BIO-RAD和GE兩家公司有售。
3.現在雙向電泳的性價比不是很高了,現在做的人越來越少,這兩家公司所生產的耗材也在減少(有些規格的耗材買不到了)


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